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Calcul de la concentration en substrat



  1. #1
    Gnouminou

    Calcul de la concentration en substrat


    ------

    Bonjour à tous
    Voilà je bugg sr une question d'un TP et j'ai besoin d'aide.
    Je dois donc rediger tout le sujet du TP pour repondre à la question ( casse tete ) mais bon ca fait parti du travail ^^
    Voici le sujet du tp

    On a : tampon citrate pH=5,5 150mM
    Soude 0.2 M
    Substrat (Para Nitrol Phenyl Phosphate) 12,8 . 10^-3 M
    Enzyme (Phosphatase acide)
    Preparer 2 séries de tubes à essai : 1 pour temoin substrat numeroté de T1 à T6, une autre pour les essais de E1 à E6

    A- Repartition du substrat

    Pour chaque serie : On introduit 0,5 mL de tampon citrate pH 5.5 dans les tubes numerotés 2 à 6 ( de E2 a E 6 et de T2 a T6)
    On met 1mL de substrat 12,8.10^-3 M dans le tube 1 ( E1 et T1) puis en prelever 0.5mL que l'on ajoute dans le contenu du tube 2 . On preleve 0.5 mL du tube 2 que l'on ajoute au tube 3 etc...
    Lorsque la repartition est fini, prelever 0.5 mL du tube 6 (qui doit contenir 1 mL) et jeter ce volume ( pour avoir 0.5 mL dans tous les tubes)

    B- Preparation de la série temoin-substrat
    Ajouter 1.5 mL de tampon citrate pH 5.5 à tous les tubes ( de T1 a T6)

    C- Preparation de la série essais
    Ajouter 1.480 mL de tampon citrate pH 5.5 à tous les tubes ( de E1 a E6)

    D- Addition de l'enzyme
    Tous les tubes sont preincubés au bain marie 37°C pendant 3 min
    20 µL de solution de Phosphatase acide (l'enzyme) est additionné au tube E1, agitation, remise dans le bain marie puis on recommence 1 min apres pour le tube 2 .. jusqu'au tube 6 de la série "essais"
    Apres 8 min d'incubation, ajouter 1 mL de soude 0,2 M dans les tubes essais en respectant le meme ordre et les meme intervalles de temps que lors de l'addition d'enzymes. Agiter. Arretez ensuite les tubes "temoin-substrat" en ajoutant egalement 1mL de soude 0,2 M ( l'hydrolyse du substrat est faible car pH 5.5)

    QUESTION: Calculer les concentrations en substrat dans les tubes apres l'ajout de l'enzyme

    Cette question laisse dire que l'on calcul seulement la concentration en substrat dans les tubes esais car on a pas mis d'enzyme dans les tubes temoins.

    Merci de bien vouloir m'aider pour cette unique question

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    Gnouminou

    Exclamation Re : Calcul de la concentration en substrat

    une aide rapide s'il vous plait merc beaucoup je dois faire cette question avant mardi.
    Merci

  4. #3
    HarleyApril

    Re : Calcul de la concentration en substrat

    C'est une série de dilution successives.
    Dans le premier tube, tu mets 1mL de substrat.
    La concentration est donc 12,8x10-3mol soit 12,8mmol
    J'en prends 0,5mL que je mets dans le tube numéro deux
    Celui-ci contient déjà 0,5mL.
    La concentration va donc être divisée par deux et sera de 6,4mL.
    Je te laisse deviner que chaque dilution divisera la concentration par deux et finir les calculs ...

  5. #4
    Gnouminou

    Re : Calcul de la concentration en substrat

    en fait on doit calculer la concentration de chaque tubes apres les differentes dilution.
    Mais le probleme n'est pas là en fait car je dois determiner la concentration en substrat apres l'ajout de l'enzyme et là tu me guide pour le calcul de la concentration en substrat avant l'ajout de l'enzyme.
    En fait resumons:
    dans le tube 1 : 12.8 mM de substrat avant l'ajout d'enzyme
    dans le tube 2 : 6.4 mM de substrat avant l'ajout d'enzyme
    dans le tube 3 : 3.2 mM de substrat avant l'ajout d'enzyme
    dans le tube 4 : 1.6 mM de substrat avant l'ajout d'enzyme
    dans le tube 5 : 0.8 mM de substrat avant l'ajout d'enzyme
    dans le tube 6 : 0.4 mM de substrat avant l'ajout d'enzyme

    Apres l'ajout d'enzyme, donc de 20 µL de phosphatase acide, on ajoute aussi de la soude.
    La question c'est quelles sont les concentrations en substrat des differents tubes E1 à E6 apres l'ajout de l'enzyme

    Merci de bien vouloir me repondre
    Dernière modification par Gnouminou ; 10/02/2008 à 23h00.

  6. #5
    HarleyApril

    Re : Calcul de la concentration en substrat

    on ajoute 20µL et 1mL
    tu peux négliger les 20µL
    chaque tube contenait 1mL et tu ajoutes 1mL
    qu'est-ce que ça peut bien faire comme dilution ?

    Je crois que tu devrais y arriver

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Gnouminou

    Re : Calcul de la concentration en substrat

    non on a pas 1mL dans les tubes E1 a E6 parce qu'on rajoute 1.480 mL de citrate avant l'ajout d'enzyme. Vu que la biochimie c'est precis je ne pense pas qu'il fait negliger les 20 µL = 0.02 mL car 1.480 mL de citrate + 0.5 mL de la solution initiale + 20µL d'enzyme = 2.5 mL (un chiffre "facile")
    Et aux 2.5 mL on ajoute encore 1 mL de la soude, ca fait donc une solution totale de 3.5 mL dans chaque tubes de E1 à E6
    Donc ca fait beaucoup de solution et de concentration et je n'arrive pas à tirer dedans la concentration du substrat

    Aidez moi s'il vous plait c'est urgent et je veux y arriver car je m'attarde beaucoup dans cette question en vain, je tourne autour du pot entre toutes ces solutions que l'on rajoute.
    Merci beaucoup d'avance

    PS: j'ai essayer d'exploiter la formule C1V1=C2V2 mais en vain je n'y arrive pas.

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  10. #7
    HarleyApril

    Re : Calcul de la concentration en substrat

    la formule magique C1V1=C2V2 !
    C1V1 correspond au nombre de mole de substrat
    Tant que tu ajoutes d'autres composants, tu n'ajoutes pas de moles de substrat.
    Ledit nombre de mole reste donc invariant.
    La seule chose qui varie est donc le volume total.
    Le titre après dilution est donc C2=C1V1/V2 avec
    C1 titre initial
    V1 volume initial
    V2 volume total final

    j'espère qu'avec ça, les dilutions ne te poseront plus jamais de problème.

  11. #8
    Gnouminou

    Re : Calcul de la concentration en substrat

    Citation Envoyé par HarleyApril Voir le message
    la formule magique C1V1=C2V2 !
    C1V1 correspond au nombre de mole de substrat
    Tant que tu ajoutes d'autres composants, tu n'ajoutes pas de moles de substrat.
    Ledit nombre de mole reste donc invariant.
    La seule chose qui varie est donc le volume total.
    Le titre après dilution est donc C2=C1V1/V2 avec
    C1 titre initial
    V1 volume initial
    V2 volume total final

    j'espère qu'avec ça, les dilutions ne te poseront plus jamais de problème.
    Ok merci


    Donc si j'ai bien compris si on veut calculer la concentration en substrat dans les differents tubes E1 à E6 apres l'ajout de l'enzyme, on a

    C2=C1V1/V2
    avec C1 = concentration du substrat avant l'ajout d'enzyme ( les concentrations sont differentes du tube E1 aux tubes E6)
    V1 = 0.5 mL ou 1.980 mL ? ( car avant l'ajout d'enzyme il y a 1.980 mL de solution dans les tubes car on a ajouté du citrate aus solutions initiales présentes dans les tubes E, soit 0.5 mL + 1.480 mL )
    V2 = volume de la solution finale (0.5 + 1.480 + 0.02 mL + 1mL = 3.5 mL ou 0.5 + 1.480 + 0.02 mL = 2.5 mL ? vu que la soude est ajouté apres l'enzyme ...)
    C2 : concentration en substrat apres l'ajout d'enzyme

    Donc les 2 dernieres questions V1= 0.5 ou 1.980 mL et V2 = 2.5 ou 3.5 mL ?

    Merci enormement

  12. #9
    HarleyApril

    Re : Calcul de la concentration en substrat

    pour ta gamme, tu as calculé les concentrations en substrat dans les tubes qui contiennent chacun 0,5mL (c'est dit dans l'énoncé)
    Tu as donc les différentes valeurs de C1 et V1=0,5mL
    C'est à partir de ça que tu vas faire une nouvelle dilution.
    Dans les tubes témoins, comme dans les tubes essais, tu ajoutes ensuite 1,5mL. Tu as donc un volume total de 2mL (tu t'es trompé dans ton addition ). C'est là que la concentration est intéressante.
    V2=2mL

    La suite, c'est l'arrêt de la réaction, la concentration a moins d'intérêt.

    Bonne continuation

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