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Spectrophotométrie




  1. #1
    cleminou

    Spectrophotométrie

    Bonjour,

    Imaginons que je dois étudier l'absorption d'une solution de concentration c0. Je trace la courbe d'absorption de la solution (A=f(landa)) et je détermine le maximum d'absorption de la solution (landa max).
    Ensuite je dois étudier la variation de l'absorbance en fonction de sa concentration. Je prépare donc à partir de ma solution mère de concentration c0, 5 solutions filles.

    mais j'ai une petite question : pourquoi les mesures d'après doivent être effectuées à landa max ?

    -----


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  3. #2
    Pikagiu

    Re : Spectrophotométrie

    Tout simplement parce que Lambda max est la longueur d'onde pour laquelle l'absorbance est maximale ce qui permet d'avoir des valeurs plus précises quand tu fait ton graphe des concentrations en fonction de l'absorbance!
    mais tu pourrais le faire à un autre lambda si tu le voulais. tu aurais juste une erreur relative plus élevée!

  4. #3
    cleminou

    Re : Spectrophotométrie

    D'accord, merci.
    J'ai une autre question.
    Je ne comprend pas bien ce que signifie : Régler le zéro à la longueur d'onde choisie, vérifier l'étalonnage du spectromètre avec la soltion étalon et mesurer l'absorbance par rapport à la référence.


  5. #4
    Pikagiu

    Re : Spectrophotométrie

    bon,bon là je risque d'être moins claire
    1) regler le 0 veut dire qu'à chaque fois que tu changes de longueur d'onde tu dois bien vérifier que ton aiguille (si comme nous tu as des instrument préhistoriques) ou ton indicatieur digital d'absorbance est bien à 0.. maintenant je ne sais plus très bien pourquoi à chaque fois ca peut bouger...

    Qu'est ce que tu entends par solution étalon, c'est une solution dont tu connais la concentration, c'est celle que tu as utilisée pour faire ton premier graphe ou c'est ce qu'on apelle "un blanc"?

  6. #5
    cleminou

    Re : Spectrophotométrie

    Un blanc je pense.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Pikagiu

    Re : Spectrophotométrie

    en fait tes solutions tu les mets dans des récipients en verre pour mesuer leur absorbance, ce verre (à cause de la réfraction) peut racouricir ou allonger le trajet otique L, il faut donc que tu "étalonne" ton spectro avec une solution incolore contenue dans le même verre que celui que tu utiliseras après!
    c'est un peu comme quand tu pèses quelque chose dans un récipent et que tu tare à 0 le système balance+ récipient...
    je sais pas si j'ai été très claire

  9. #7
    cleminou

    Re : Spectrophotométrie

    Oui, merci et bonne journée.

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  11. #8
    Zellus

    Re : Spectrophotométrie

    Bonjour,

    Ca me semble pas très clair tout ça à moi désolé.
    Pour moi faire le blanc, c'est faire une mesure d'absorbance, à la longueur d'onde choisie, en mettant dans ta cuve uniquement ton solvant dans lequel se trouve la molécule que tu étudies. Et ton spectrophotomètre le considèrera comme ta ligne de base (ton zéro) pour tes prochaines mesures.
    La solution étalon est une solution dont tu connais la concentration. Tu en fais des dilutions et tu mesures leur absorbance après avoir fait le blanc. Tu peux alors tracer la doite étalon (A = f(C)) de cette solution. C'est elle qui te permettra après de connaître la concentration de ta molécule à partir de l'absorbance que tu vas mesurer.

    Citation Envoyé par Pikagiu
    ce verre (à cause de la réfraction) peut racouricir ou allonger le trajet otique L
    Heu, le trajet optique ne change pas, il dépend uniquement de l'épaisseur de ta cuve.

  12. #9
    Pikagiu

    Re : Spectrophotométrie

    pour le blanc je suis d'accord avec toi mais comme souvent (en tous cas quand tu fais des manip de base) ton solvant est transparent on utilise de l'eau distillée comme blanc c'est pour cette raison que j'ai utilisé le terme "transparent"!

    Pour l'histoire de la solution étalon je ne me rappelais plus ce que ça désignait donc en fait tu m'a aidé aussi, merci!

    par contre OUI la réfraction peut allonger le trajet optique: puisque le rayon est dévié puis redressé il parcourt une plus longue distance(une diagonale est plus longue qu'une ligne droite) . Si tu persiste dans cette idée tu peux me l'expliquer clairement? parce qu'alors j'ai dû mal comprendre quelque chose au cours et ça risque d'etre gênant aux examens!

  13. #10
    Zellus

    Re : Spectrophotométrie

    Citation Envoyé par Pikagiu
    pour le blanc je suis d'accord avec toi mais comme souvent (en tous cas quand tu fais des manip de base) ton solvant est transparent on utilise de l'eau distillée comme blanc c'est pour cette raison que j'ai utilisé le terme "transparent"!
    Oui bien sûr un solvant transparent c'est pas très gênant lorsque tu veux mesurer l'absorbance d'une solution colorée. Mais personnellement je suis biologiste et je mesure souvent l'absorbance de protéines ou d'ADN, et là la solution reste transparente et les mesures se vont dans l'UV (avec des cuves en quartz et pas en verre ou en plastic) et pas dans le visible donc il faut bien faire le zéro. Et il arrive aussi que je fasse des mesures dans l'UV et que le blanc soit une solution colorée.

    Citation Envoyé par Pikagiu
    par contre OUI la réfraction peut allonger le trajet optique: puisque le rayon est dévié puis redressé il parcourt une plus longue distance(une diagonale est plus longue qu'une ligne droite) . Si tu persiste dans cette idée tu peux me l'expliquer clairement?
    Je persiste à dire que le trajet optique correspond à l'épaisseur de la cuve l qui intervient dans la loi de Beer-Lambert qu'on utilise pour calculer la concentration à partir de l'absorbance mesurée. Ce qui est mesurée par le spectrophotomètre est la lumière transmise et elle provient du faisceau incident qui arrive perpendiculaire à la surface plane de la cuve. La lumière n'est donc que très peu déviée, c'est à dire que la réfraction est négligeable. Il y a des limites tout de même comme tu peux le voir ici mais on travaile rarement (voire jamais pour ma part) à de telles concentrations.

    J'espère avoir été clair.
    Cordialement,
    Zellus

  14. #11
    Pikagiu

    Re : Spectrophotométrie

    alors pourquoi a chaque nouvelle longueur d'onde faut-il remattre à 0 avec la blanc? quelle est la raison de cette opération si ce n'est ce problème de trajet optique? parce que entre temps je suis allée vérifier dans mes notes de travaux pratiques et c'est bien laraison qu'ils me donnent!

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