Hello,
Grand besoin de vos connaissances, ou d'un lien pour un site qui ne cherche pas à vendre des cours
Je fais exceptionnellement du développement de méthode HPLC et j'ai besoin d'un bon rafraichissement de mémoire, quels sont tous les moyens possibles pour affiner la séparation de 2 pics?
On peut bien sur jouer avec la pression mais j'aimerais ne pas perdre trop de temps pour l'analyse...
Pratiquement tous les paramètres peuvent jouer sur la résolution des pics: éluant, support, vitesse d'élution, concentration du dépôt...
Voilà qui ne m'arrange pas, je voulais éviter de changer le support car j'ai 3 composés qui sont très bien séparés par la méthode que j'utilise actuellement... Est-il possible qu'un composé pur soit séparé en 2 pics collés l'un à l'autre?
tu peux joeur aussi sur la variance externe ce qui te permettra de diminuer la largeur de tes pics et ainsi de mieux les separer.
Pour cela diminuer le volume injecté, diminué le volume de la cellule UV, enfin diminuer tous les volumes morts quoi!
Sinon debit de phase mobile, courbe de van deemter pour etre à l'optimum.
Eluant, tu fais une analyse avec deux concentrations d'eluants differents, tu traces log k en fonction de la concentration de ton melange eluant et tu prend la concentration pour laquelle les deux droites sont le plus eloigné et qui te donne le temps d'analyse le plus court.
voila c'est à peu pres tous je crois.
Si le composé est pur (absence d'isomères) et que l'échantillon introduit est homogène, il doit sortir en 1 seul pic.
Il arrive que des pics soient dédoublés dû (parfois) à un défaut de tête de colonne, dans ce cas tous les pics sont dédoublés.
Merci beaucoup,... au boulot!
Tu peux avoir un pic dédoubler si ton solvant de dilution n'est pas aussi polaire que ton (tes) éluant(s)
Par ex : solvant de dilution ACN et tu passes dans un système ACN / eau ... ça pose un problème de solubilité en tête de colonne.
En fait je travaille en isocratique avec comme phase mobile un tampon NaH2PO4/ACN (82/18), et mon solvant de dilution est l'eau. Et même en injectant mon standard certifié à 100 % j'ai ce dédoublement de pic, je me demande alors si c'est peut être un isomère (mais y'a t'il des isomères de l'acésulfame K? je ne crois pas) ou un problème dans mon appareillage...(?)
Y a peu de chance que ce soit un isomere vu que pour les separer il faut des colonnes speciales.
