Rôle du tampon sur le temps de rétention??

[invite7c9206fe]

salut

je cherche à savoir le rôle du tampon sur le temps de rétention des molécules.

pour vous rapprochez le plus de ce que je cherche à savoir, alors je vous explique mon problème:

j'ai essaillé de trouvé les pics de la digoxin et de la digitoxin à partir de la phase mobile composée d' ACN/H2O filtré (35/65), mais le pic de la digitoxine apparait trop loin à 35mn et celui de la digoxin est un peu proche au front du solvant, alors j'ai remplacé l'eau par le tampon d'acide acétique glacial 0,02M à pH=5,4 dont le but qu'ils se rapprochent mais aucun changement, mon but c'est de repousser le pic de la digoxin et de faire rapprocher celui de la digitoxin à ce dernier.

Donc maintenant je me demande s"il faut ajouter de plus le tampon ou c"est un problème de pH

veuillez m'aider , merci
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[inviteac45697a]

si ta machine le permet, tu peux faire un gradient de phase pour rapprocher le deuxième pic. (et éloigner le premier)

sinon tes molécules sont acides ou basiques ?
si oui regarde avec leurs pka pour savoir dans quelles conditions il faut se mettre pour améliorer la séparation

[invite710cad08]

Salut

Je ne vois pas trop l'intêret du tampon étant donné que pour moi, ces molécules ne contiennent pas de fonctions acides.

Pour améliorer la séparation, j'aurais plutôt fait comme le conseille Gramon, un gradient de phase.

[invite7c9206fe]

Salut,

je vous remercie pour votre aide.
En effet, je vais utiliser le gradient d'élution, et je trouve que c la seul solution pour faire rapprocher les 2 pics

Merci

[A voir en vidéo sur Futura]