Role de l'etalon interne

[invite327495e0]

bonjour,

J'ai fait un chromatographie en phase gazeuse mais je ne comprend pas vraiment le role et l'utilisation d'un etalon interne
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[moco]

L'étalon interne est le seul moyen qui te permettra de déterminer la quantité de substance contenue dans ton échantillon.
Imagine que tu injectes un certain volume d'une solution de ... vératrol et que l'analyse du chromatogramme obtenu avec ce mélange te dise que le pic du vératrol a une hauteur de 48 mm (ou une surface de 72 mm2). Tu n'as aucun moyen de connaître la quantité en milligramme du vératrol contenu dans ton échantillon. La seule façon de le savoir est de refaire la même chromatographie en ajoutant disons 0.2 millimole de vératrol à ta solution.
Si alors, la hauteur du pic augmente de 1/4 et passe de 48 à 60 mm (ou la surface de 72 à 90 mm2), tu sauras que ton échantillon initial contenait 4 fois plus de vératrol que l'étalon interne, donc 0.8 millimole.

[invite327495e0]

ok merci

[Ragalorion]

A part que ce que tu décris Moco ce n'est pas de l'étalonnage interne mais du dosage dit par "ajouts dosés".

L'étalonnage interne consiste à doser une entité A en rajoutant à tes solution d'étalonnage ainsi qu'à ton échantillon à doser une quantité connue d'une substance X (de préférence toujours la même).

Concrètement : lorsque tu fais une courbe d'étalonnage d'une substance A sans étalonnage interne, tu te contente de préparer diverses solutions de concentrations variables de ton analyte A, puis tu traces ta droite d'étalonnage ou tu fais correspondre la réponse obtenue (l'aire ou la hauteur du pic obtenu sur chaque chromato) avec la concentration de chaque échantillon.
Si tout se passe bien, la réponse est bien linéaire et ta droite en est une.
Quant tu injectes ta solution de concentration inconnue, tu regardes sur ta droite à quelle concentration correspond la réponse que t'a donnée le chromatogramme et tu en déduit ainsi la concentration de ta solution inconnue.

Cependant, la réponse de certains détecteurs peut être légèrement "flottante" (deux injections d'une même solution peuvent te donner deux réponses légèrement différentes) selon la méthode d'injection et la nature du détecteur.
On peut alors corriger en rajoutant un étalon interne.
Lors de l'étalonnage, tu rajoutes à chacune de tes solutions de concentration différentes une quantité connue (toujours la même) d'une autre molécule X qui sera le fameux étalon interne.
Tu vas alors t'intéresser au rapport des réponses entre la molécule A et la molécule X.
Si la réponse obtenue pour une solution de la molécule A subit une perte d'intensité (elle te donne par exemple 50 mm² alors que lors d'une autre injection elle t'aurait donner 60 mm²) dûe à un problème d'injection ou de détection, en supposant que l'étalon interne va subir la même "perte d'intensité" dans sa réponse, vu que tu vas t'intéresser au rapport entre les deux réponses de A et de X et non à la réponse même de A, l'éventuelle erreur du à l'instrumentation sera "corrigée".
L'étalonnage interne permet alors d'obtenir des courbes d'étalonnages linéaires dans des cas où l'absence d'étalonnage interne aurait donné des courbes non linéaires.

En injectant alors la même quantité d'étalon interne dans ton échantillon inconnu et en faisant le rapport des réponses de ta molécule à doser A et de ton étalon interne, tu peux alors te rapporter à ta droite d'étalonnage réalisée à l'aide de l'étalon interne.

[A voir en vidéo sur Futura]