Problème de validation de méthode

[invite17d4c253]

Bonjour à tous, j'ai plusieurs problème sur une validation de méthode. Je suis apprentie et c'est la première fois que je fais ca. Peronne ne peut m'aider dans mon entreprise car c'est la même chose pour eux, ils n'en ont jamai fais.

- ma droite d'étalonnage suit une tendance polynomiale, donc non linéaire. Est-ce génant pour une validation de méthode???

- il m'a allu déterminer une LOD et LOQ. Pour cela j'ai passé mon blanc sur la chaine HPLC (du méthanol sur une phase ACN/eau acidifié). Je n'ai obtenu aucun pic donc j'ai pris la valeur du bruit de fondet j'ai fais 3*écart type du bruit de fond pour LOD et 10*écart type du bruit de fond pour LOQ. Pensez vous que j'ai utilisé la bonne méthde??

Je suis perdu loool ce sont 2de tous mes problèmes. Mais si, ceux-ci pouvaient être réglé ça me soulagera énormément

Merci à tous
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[invite75f7061b]

Bonjour,

avant de répondre à ta 1ère question, es tu réellement sûre que ta courbe d'étalonnage est de type polynomiale ?

Comment l'as tu déterminée ? As tu vérifié que lorsque tu injectais un blanc (pas un placébo mais juste du solvant - le même que ta phase mobile), tu obtenais quand même un signal ?

Et pour aller plus loin, es tu sûre que ce signal n'est pas simplement dû à un relargage de ta colonne qui pourrait être dû
- à un vieillissement,
- dégradation quelconque par une injection précédente (genre solution fortement acide , ou basique)
- une saleté "accrochée à ta colonne", etc..) ?

Les cas de non linéarité sont assez rare mais tout à fait possibles. Les cas auquels j'ai été confrontés n'avaient pas un rayon de courbure important. Dans ce cas, on réduit la gamme de travail pour retomber sur une partie pseudo linéaire - c'est un peu de la bidouille mais cela fonctionne.

Si je me suis mal exprimé, n'hésites pas à me redemander.

Bonne journée

[moco]

Nous pourrions peut-être t'être plus utile si tu expliquais mieux ce que tu fais. Quelle substance cherches-tu à analyser ? Est-ce que tu vois le pic du solvant ? Quel est ce solvant ? A peu près en quelle concentration, ton soluté ? 0.1 M ou 10^-9 M ? Est-ce que ta solution contient un ou mille constituants ? Quel détecteur utilises-tu ? Peux-tu en changer la sensibilité ?

[invite04f8dfd1]

Bonjour Dodie et bienvenue sur le forum,

L'histoire de la LOD et LOQ qui correspondent à 3 fois ou 10 fois le bruit de fond n'a aucune réalité mesurable.

Dans la vraie vie:
Pour la LOD, on injecte une concentration décroissante de l'extrait à analyser (avec matrice) jusqu'à ce que l'on ait un pic dont le signal se détache du bruit de fond (signal-to-noise ratio calculé en peak-to-peak =3)

Pour la LOQ, c'est la concentration la plus faible possible à laquelle la technique est capable de donner le résultat attendu avec justesse (100% +/- X% de la valeur cible) et avec un RSD inférieur à Y%.
X et Y peuvent être égaux (et c'est souvent le cas) et sont fixés par ton application et la technique utilisée, mais aussi le domaine de concentration dans lequel tu travailles. C'est-à-dire ce qui est communément admis par les scientifiques qui travaillent dans ton domaine et sur ces mêmes applications. Selon le cas, ça peut varier de2-3% à 30-35%.

Pour le reste, moco a raison, plus de détails nous aideraient à te répondre.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite3142cfbe]

Salut,

Personnellement je trouve que tous les experts au-dessus de ma réponse ont raison, mais je m'intéresse beaucoup au même point que DRogalie.

Il est plutôt peu fréquent d'obtenir une courbe d'étalonnage polynomiale. Généralement on s'inquiète plutôt de la qualité de notre courbe d'étalonnage, particulièrement si on parle d'une courbe polynomiale à degré assez élevé(4,5,6..!!)

Le problème avec ces courbes et les algorithmes de calculs qui les forment est qu'ils font du "fitting" comme on aime bien appeler. Ils vont forcer la droite à passer par tes points, peu importe par où elle passe entre les différents points. Tout ce qui importe à l'ordinateur est que la courbe passe le plus près de tes x points.

Souvent, si tu vois une courbure dans ta droite d'étalonnage, j'aurais tendance à penser à quelques solutions:

- Diminuer ta concentration maximale
---Si tu courbes, c'est peut-être que tu approches la saturation de ton détecteur pour cette substance.

- Rapprocher les points de ta droite d'étalonnage
---Il est normal qu'une droite ne soit pas linéaire si le domaine de concentrations sur lequel elle se trouve est trop grand.

- Faire une autre courbe d'étalonnage à des concentrations plus faibles
--- Vérifier la linéarité à ces concentrations te montrera si tu as tord ou raison avec ta première courbe.


Enfin, peut-être que tu connais tout ça, et si c'est le cas, suis alors le conseil de moco et reviens nous en parler plus.

[HarleyApril]

---Il est normal qu'une droite ne soit pas linéaire

en effet, elle peut être affine

plus sérieusement, le lecteur avisé corrigera en :
il est normal qu'une courbe d'étalonnage ne soit pas linéaire


cordialement