Bonjour j'essaye de préparer mon tp de biochimie et il me reste quelques doutes j’espère que vous pourrai m'orienter !

J'étudie les paramètres cinétiques de la phosphatase alcaline (pal).

Pour ça j'utilise du PNPP (substat) qui est hydrolysé en PNP (produit) par la pal.

Je doit préparer 2 séries de 5 tube pour voir l'influence d'un effecteur (Na2HPO4
série 1 : PNPP 1mmol/L + Tampon pH
série 2 : PNPP 1 mmol/L + Tampon pH + Effecteur 10mmol/L

Ensuite on ajoute l'enzyme (0.5ml) , on laisse incuber dans les conditions optimum puis on mesure l'absorbance à 405nm.


Grâce à ça je dois :

>déterminer la concentration en PNPP (mmol.L-1 de solution réactionnelle).
<En utilisant la loi de Beer Lambert : A = e.C.l
donc C = A/(e.l) le problème c'est que ça me permet de calculer la concentration en PNP (produit) et non pas en PNPP.

>donner une formule de résolution de Vmax (µmol PNP/L de solution totale/min et en µmol PNP/L de solution réactionnelle/min)

>calculer la concentration d'activité catalytique (µmol PNPP transformé/min/L de solution enzymatique)
< j'ai trouvé que Ccat = A/(e.l.min) x Vtotal/Venzyme

>trouver la quantité de pal en µmol de PNPP transformé/min/g

Je ne vois pas comment à partir de l'absorbance on peut trouver toutes ces valeurs .
J'espère que vous aurai quelques indices à m'apporter ! Merci