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Hplc



  1. #1
    mounhyuk

    Hplc


    ------

    salut , j'ai un problème dans la détection de l'acrylamide par le HPLC: LC-MS avec une phase mobile 6% acétonitrile et 94%eau ultra pure mais je n'ai eu qu'un grandddddddddddddddddd pic avec un temps de rétention de 3.7min et j'arrive pas à expliquer de quoi il s'agit . comment je peux détecter le pic d'acrylamide .
    les paramètres de mon HPLC : débit 0.5 ml/min , température 30°C , longueur d'onde 210 nm.
    s'il vous plait j'attends vos réponses

    -----
    Dernière modification par mounhyuk ; 27/02/2013 à 21h41.

  2. Publicité
  3. #2
    ZuIIchI

    Re : Hplc

    Il faudrait peut-être préciser ce que tu as injecté dans l'appareil. Etait-ce de l'acrylamide pur ? Un mélange contenant l'acrylamide ?

    Pour la longueur d'onde je ne sais pas si elle est juste. Pour trouver le maximum d'absorption il faut faire au préalable un spectre UV-visible de la substance pure dans le même solvant que celui que tu as injecté dans la colonne. Mais si tu as introduit un échantillon pur alors il ne devrait pas y avoir d'ambiguité : 1 substance produit 1 pic.

  4. #3
    sfnsfn2

    Re : Hplc

    pour la rétention:
    selon les conditions (composition de la phase mobile) je pense que on est dans la phase inverse
    l'acrylamide est un composé polaire logP = -0.7 et une solubilité dans l'eau de plus de 500g/l
    ce qui augmente sa vitesse d'élution et diminue le temps
    pour augmenter la rétention:
    changer la composition de la phase mobile: diminue la fraction de l'eau
    phase normale : problème de solubilité
    utilisation d'un paire d'ions: problème de volatilité et de bruit de fond en LC-MS
    chromatographie d'interactions hydrophilique HILIC : meilleur choix pour ce type de composés

    pour la détection:
    l'acrylamide n'absorbe pas bien dans l'UV: pas de chromophore important
    une longueur d'onde basse n'est pas spécifique pour ton composé: on est proche du cut-off de l'eau: 200nm et 190nm pour l'acétonitrile

    peut etre que la concentration est élevée !!!
    on peut confirmer par la fragmentation en LC-MS : la masse est utile dans ce cas
    qui se ressemble s'assemble (Homère)

  5. #4
    mounhyuk

    Re : Hplc

    je vous remercie énormément je vais essayer vos propositions et j’espère que j'ai un résultat

  6. A voir en vidéo sur Futura

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