Bonjour à tous , est ce que quelqu'un peut m'expliquer ceci ? (cf : chromatographie)
"La phase stationnaire (liquide) est immobilisée dans une colonne ou sur un support inerte ou poreux , par imprégnation ou le plus souvent par greffage.La séparation repose sur le coefficient de partage du soluté entre les 2 phases "
Si tu ne sais pas ce qu'est un coefficient de partage, lis déjà ceci : http://fr.wikipedia.org/wiki/Coefficient_de_partage
Si tu maîtrises bien la notion tu devrais comprendre le reste. Il y a une phase stationnaire qui "tapisse", pour imager le concept, l'intérieur de la colonne. On introduit ensuite dans la colonne le mélange à séparer puis la phase mobile, qui va traverser la colonne et sortir. La force motrice de la chromatographie est le coefficient de partage. Si le mélange est composé de 2 produits, un très polaire et un autre qui l'est un peu moins, ces 2 produits vont se séparer progressivement car l'un aura une affinité relativement forte avec la phase stationnaire et une moindre avec la phase mobile. Il sera donc plus retenu que l'autre produit qui sortira donc plus vite.
Pourquoi ? Ce système repose sur un déplacement d'équilibre. Admettons que le produit X soit mieux retenu par la colonne, sa concentration dans la phase stationnaire augmente. Du coup, la concentration de l'espèce Y qui a moins d'affinité avec cette phase diminue progressivement. Où par Y ? Dans la phase mobile qui l'emporte jusqu'à la sortie. Comme la phase mobile qui entre dans la colonne ne contient pas de soluté, elle dissout du produit à chaque fois qu'elle en rencontre et déplace ainsi l'équilibre.
Je ne sais pas si je suis très clair mais n'hésite pas à demander plus de précisions ou à me soumettre un exemple
Re ZuichiJ'ai presque tout compris grâce à toi ! Dans la chromatographie liquide-liquide dont tu parles , la phase stationnaire est un liquide figé alors ?
Je n'ai pas parlé de chromatographie liquide-liquide. Le coefficient de partage trouve aussi une application en EXTRACTION liquide-liquide. Dans un colonne si la phase stationnaire n'est pas "accrochée" à la colonne alors ... elle se barre et n'est plus ... stationnaire.
Et un liquide figé s'appelle un solide
Tout le procédé que tu as décrit c'est une chromatographie de quel type ?
il existe bien de l'HPCL liquide-liquide (où la phase stationnaire est une sorte de film liquide). C'est de HPLC par partage, repose sur le coeff de partage.
Après, il y a aussi l'HPLC solide-liquide (où la phase stationnaire est un solide proprement dit). C'est de l'HPLC d'adsorption, repose sur le facteur de rétention.
et il en existe encore un grand nombre
on peut faire ça sur cellulose aussi ?
est ce que vous pouvez m'expliquer ceci ? "La progression du solvant entraine les molécules de soluté vers le bas de la colonne en une série continue de transferts entre les 2 phases" (cf. chromatographie d'élution sur colonne)
Oui, en fait il faut comprendre que c'est un ensemble d'équilibre. Si on prend un colonne chromato de base. On va dire phase stationnaire (PS) polaire soit de la silice. Il faut comprendre que tout le long de la colonne, il y a des groupements OH. Ensuite, vous avez dans votre phase mobile (PM) qui est peu polaire, vos molécules à séparer qui dans notre exemple sont plutôt polaires. La molécule A arrive avec la PM elle va se fixer sur le premier hydroxy puis va se décrocher et retourner dans la PM pour laisser place à une autre molécule de A qui va venir prendre sa place. et la première A va venir se fixer à nouveau sur l'hydroxy du dessous puis se décrocher et ainsi de suite. Car on est sous pression, donc la PM force les molécules à aller vers la sortie de la colonne. J'espère que c'est plus clair.
Et c'est à cause de ça qu'on voit des bandes tout au long de la colonne ?
Les bandes représentent ta séparation. Si on prend la menthe au début c'est vert, puis on commence à voir du bleu et du jaune. c'est 2 colorants sont séparés car ils sont une affinités différentes avec la PS. Mais la plupart du temps tu n'as pas de bandes aussi marqués. Tu récupères des tubes, tu fais des CCM et tu regroupent les fractions identiques ensembles tu évapores le solvant et tu fais un analyse RMN pour vérifier la structure de ton produit
mais c'est bandes signifient qu'en étant emportées par la phase mobiles, les moélcules restent groupées ?
En effet, car un type de molécule possède un type d'affinité particulier avec la PS. Donc, toutes les A seront ensemble et toutes les molécules de B aussi. c'est justement le but rechercher. Avoir un produit pur ne contenant qu'un seul type de molécule
Parfait merci. J'ai une dernière petite question
Zuichi a mentionné la dilution de l'analyte. J'ai très bien compris, nénmoins dans mon cours ils insistent sur ceci :" Les détecteurs utilisés doivent être plus sensibles que si la séparation n’avait été nécessaire" Je ne comprends pas cette remarque ^^
Cette phrase n'est pas écrite en français
Ce que tu dois peut-être comprendre c'est qu'un bon détecteur doit être sensible, c'est à dire qu'il puisse détecter un produit même en concentration de l'ordre du ppm. C'est une des quelques qualités que dois posséder un bon détecteur. Si il est polyvalents voire universel c'est encore mieux. Si il n'est pas destructif c'est encore mieux mais généralement chaque détecteur à ses points forts/faibles.
Re. J'ai une petite question sur les coefficients de partage.
Une molécule a généralement une affinité ≠ selon les milieux.
Une molécule polaire a une affinité nettement supérieure pour des milieux polaires
une molécule apolaire a une affinité nettement supérieure pour les milieux apolaires.
Si ces milieux ne sont pas miscibles entre eux, la molécule va se répartir entre ces 2 milieux en fonctions del’affinité. On peut alors définir un coefficient de partage entre ces 2 milieux.
mais on peut aussi définir un coefficient de partage entre des états ? une molécules préfère se distrubué dans une phase liquide ou bien solide ou gazeuse etc. ?
Après, on a plusieurs type d'analyse. HPLC où ton mélange a séparer est solubilisé. On peut faire de la chromato flash ce que l'on fait en tp mais les analystes aiment pas car la silice est trop polaire, il faut tout le temps qu'elle soit réhydraté, et puis la séparation n'est pas forcément reproductible. Et vu que c'est extrèmement polaire ton produit peut rester accroché voir s'absorber complètement dessus. Après, y a la cpg ou tu analyses des composés volatils.
Bonjour je relisais ceci et je me suis posée une question. Toute cette dilution dont vous parlez va se produire avec tout les types de chromatographies ? une fois que la molécule a séparé a moins d'affinité pour la phase stationnaire donc moins soluble dans la phase stationnaire , ellesera moins retenue par la pahse stationnaire et aura une meilleure affiité pour la phase mobile d'où elle se diluera et sortira plus vite de la colonne ?Envoyé par ZuIIchI
