Probleme colonne HPLC

[invitee4a4c7d8]

Bonjour
J'ai actuellement un problème avec ma colonne hplc.
Je suis actuellement stagiaire dans une pme qui veux s’étendre dans le domaine chimique on m'a confié la hplc mais un peu en mode démerde toi, bonne chance.
Après avoir réussi a régler différente galères( fuites, pompes a vides pleine d'air etc..) j'ai réussi a la faire fonctionner en rinçant le circuit avec de l'eau ultra pure sans la colonne mais des que je l'ai branché la pression s'emballe sauf si je reste a des flux ridicule de 0,1ml au niveau des pompes ( et j'ai pas l'impression que le liquide passe la colonne).
C'est une colonne C18 de 5cm. Je n'ai pas de precolonne et les solvant ne sont pas filtré mais sorte directement du flacon de conservation.
Merci pour votre aide
-----

[vpharmaco]

Quel est le diamètre de la colonne ? Est ce que les particules sont de taille <2 um ?

[invitee4a4c7d8]

Colonne Discovery HS C18, 5µm, dimension 5cmx2.1mm.
Je ne sais pas dans quel solvant elle à été conservé (elle à été utilisé lors d'un précédant stage) après avoir appeler le service technique du fournisseur on m'a conseillé d'essayer de la brancher a l'envers pour la nettoyer mais ils sont resté évasif sur le solvant à utiliser.

[invitee4a4c7d8]

Bon je l'ai nettoyé avec un mélange 7/3 de MeOH et d'eau. Ca marche beaucoup mieux vu que je peu aller jusqu’à un débit de 0.3ml/min sans dépasser la pression maximum( je suis quand même à 50 psi soit environ 35 bar). Les connaisseur en HPLC trouvent-ils cette valeurs normal? Par contre je crois que la différence de pression entre les deux extrémités de la colonne provoque la formation de bulles qui apparaissent de temps en temps.

[A voir en vidéo sur Futura]

[sfnsfn2]

la pression affichée dépend de la viscosité de la phase mobile (solvants et additifs utilisés), la phase stationnaire (taille des particules: plus la taille diminue plus la pression augmente et en va aller vers UPLC pour cela les phases polymériques génèrent une pression très faible ce qui donne la possibilité d'utiliser des débits très élevés jusqu'à 10ml/min, la nature du groupement attaché: pour la meme phase mobile on obtient une pression plus importante avec une C18 que une C8..., le carbone loding: plus le pourcentage de greffage est élevé plus la pression est élevé) et le débit (plus il augmente plus la pression augmente)

on ne peut pas dire que la valeur est normale ou non, pourquoi?
la réponse dépend des conditions de l'analyse (cités avant) et on peut ajouter d'autres choses comme la pression générée par les filtres de la pompes: ces filtres peuvent etre bouchés à cause de l'utilisation des sels qui peuvent précipiter surtout à ce niveau, pour cela il faut les nettoyer ou les changer

un probleme au niveau de l'indicateur de pression de la pompe: la solution est l'étalonnage

par mesure de sécurité, les fabricant indique une limite d'utilisation

une question: que veux tu dire par "sans dépasser la pression maximum"