Bonjour !

Je viens rechercher votre aide car j'ai un TP a préparer mais malgré toute ma bonne volonté impossible de comprendre... Il s'agit donc d'un TP d'enzymologie. (Si vous souhaitez avoir d'autres renseignements sur le TP posez moi la question. Je ne préfère pas poster le pdf car c'est certainement quelque chose que le prof ne veut pas qu'on diffuse).
Il faut préparer une solution volume volume d'enzyme et d'urée pour obtenir une concentration d'urée à 0,01M (préparer a partir d'une solution à 0,02M qui elle même provient d'une solution mère à 1M). On prépare 2 tubes à hémolyse avec dans le 1er 1mL d'urée 0,02M et 1mL d'eau et dans le deuxieme 1mL d'urée à 0,02M et 1mL d'uréase. On place au bain marie. Puis à différents temps (3, 6, 9, 12 et 15min) on prélève 0,1mL du mélange urée-uréase et les mettre dans des tubes contenant chacun 1mL de phénol nitroprussiate.

On prépare un blanc avec 0,1mL du mélange urée-uréase après 15minutes et 1mL de phénol nitroprussiate.
On prépare un étalon avec 0,1mL de solution NH4+ à 2.10^-3M.

Dans tous les tubes (7 au total), on rajoute 1mL d'hypochlorite sodé.
On incube les tubes 3minutes.
On ajoute 5mL d'eau dans chaque tube. Puis on lit leur densité optique à 625nm.

(Désolée du pâté d'informations mais je me suit dis que c'était indispensable pour comprendre)

1. A partir de cela je suis sensée calculer le nombre de moles hydrolysées aux différents temps dans le milieu d'incubation qui est de 2mL.
Je ne vois absolument pas comment faire ça. Je me suis dis que Beer Lambert devait certainement jouer là dedans (car densité optique = absorbance). Mais je suis quand même perdue...

2. Ensuite je suis sensée déterminer la vitesse initiale en moles par secondes. Je suppose que je peut la trouver graphiquement avec le graphique nombre de moles hydrolysées en fonction du temps. Il s'agirait alors de la pente de ce graphique me semble-t-il. Je me demandais quand même s'il n'y avait pas une méthode plus "mathématique".

Si quelqu'un aurait la gentillesse de m'expliquer je l'en remercie. Bonne journée à vous !
(Encore désolée de la masse à lire mais je ne pouvais pas faire autrement !)