Bonjour
Je souhaite effectuer le dosage des lipides totaux sur des cellules végétales broyées( poudre peu dense).
Dans notre labo mes collègues utilisent une méthode longue et peu fiable.
Je cherche:
1.vous décrire ce que je suggère
2.vous présenter la méthode actuelle et essayer de voir le rôle de chaque étape pour voir si on peu simplifier
3.vous pouvez me proposer vos idées
Merci
PS: avant de poser la question, j'ai parcouru le site
1. Je pensais:
sécher la poudre (étuve mais quelle durée et température ? 105 °C 2 heures ça irait ?)
peser : m1
réaliser une extraction dans un sohxlet
sécher ce qui reste pour enlever les traces de solvant
peser : m2
résultat: 100 * (m1-m2)/m1 -> pourcentage massique
2.méthode actuelle
prise d’essai 2 g
mélange de solvant chloroforme/méthanol dans les proportions suivantes : 2/1 .
Au bout de 6 heures de reflux éteindre le chauffage puis laisser refroidir. Recueillir dans le ballon le solvant resté dans le soxhlet.
6 heures
Dans une ampoule à décanter de 500ml, introduire le solvant, rincer le ballon au chloroforme. Préparer 400 ml d’une solution de NaCl à 10% dans l’eau, introduire 200 ml de cette solution dans l’ampoule à décanter. Agiter, laisser décanter, recueillir la phase organique et éliminer la phase aqueuse au-dessus.
A effectuer 2 fois.
Préparer 200 ml d’une solution de NaCl à 2% dans l’eau, l’introduire, agiter, laisser décanter, recueillir la phase organique, laisser la partie émulsion et rajouter 100 ml de chloroforme. Récupérer la phase chloroformique dans la phase organique précédente.
intérêt ? effectuer un relargage ?
pourquoi ne pas sécher avant et être tranquile ?
Introduire plusieurs spatules de CaCl2 dans la phase organique, mélanger, laisser en contact plusieurs heures ou une nuit si nécessaire. La solution doit être limpide. A l’aide d’une trompe à eau, filtrer sur fritté de porosité n°4, recueillir la solution limpide dans un ballon rotavapor de 500ml.
Mettre un flacon à fond plat de 15ml dans l’étuve à 50°c pendant 30 minutes, puis le laisser refroidir au dessiccateur. Le tarer à l’aide d’une balance 10-4 g, imprimer le ticket de pesée (Pe1).
Concentrer au rotavapor la solution filtrée. Lorsqu’il reste entre 5 et 10ml, les introduire dans le flacon à fond plat. Finir d’évaporer sous azote. Mettre le tube pendant une nuit à l’étuve à 50°c. Refroidir le tube au dessiccateur et le peser sur la balance 10-4 g
je trouve ça vraiment long, surtout que c'est peu fiable
3. vos commentaires, suggestions...
Bonjour,
Vous n'avez pas d'idées à ce sujet ?
merci pour vos futures réponses
il y a une faute dans le titre, il faut lire "lipides"
