Chromatographie d'exclusion sur gel

[invited2bcddab]

Bonjour,

Je dois séparer un mélange de 4 étalons dont les MM sont : 9200, 76 000, 1,1.10^6, et 3.10^6 (valeurs en Daltons)

J'ai le choix entre 3 colonnes, dont le domaine de fractionnement sont les suivants :
A : 70 000 à 4.10^5 Daltons
B : 10^5 à 1,2.10^6 Daltons
C : 10^6 à 4.10^6 Daltons

Je dois choisir la colonne qui me permettra de séparer les 4 étalons en une seule opération ....

Je sais que lors de la chromatographie d'exclusion, ce sont les molécules les plus grosses qui sont éluées, et que les plus petites peuvent passer à travers les pores du gel et être éluées en dernier
La séparation se fait donc en fonction de la MM des solutés

Mais je ne comprends pas tout à fait le terme " domaine de fractionnement ", donc je n'arrive pas à trouver la colonne adéquate, pourriez-vous m'aider ?
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[HarleyApril]

Bonsoir

La colonne A comporte des pores qui permettent à des molécules de taille 70 000 à 400 000 Da d'être séparées.
Cette colonne ne permet donc de retenir que la molécule de taille 76 000. Elle n'est donc pas adaptée.

Est-ce que tu arrives maintenant à choisir la bonne colonne ?

Cordialement

[invited2bcddab]

Je pense que la C est la plus adéquate car elle permet alors de séparer la molécule à 1,1.10^6 et celle à 3.10^6

(mais du coup les deux autres ne peuvent pas être retenues ?)

[HarleyApril]

il vaut mieux choisir la B
les deux qui sont retenus vont être séparés
les deux qui ne sont pas retenus ayant des tailles particulièrement différentes, tu as plus de chance d'observer une séparation par simple différence de vitesse de passage entre les billes

cordialement

[A voir en vidéo sur Futura]