Spectrophotométrie. Quantité finie de dioxygène.

[Xaviser]

Bonjour,

Je travaille actuellement sur une réaction consommatrice de dioxygène catalysée par une enzyme. Je peux suivre ces cinétiques enzymatiques par spectrophotométrie UV-Visible (cuvettes 10x10 tout ce qu'il y a de plus classique en PMMA).

J'aimerais travailler en quantité constante (ça n'a pas besoin d'être ultra précis) de dioxygène solubilisé initialement. Les cinétiques peuvent durer jusqu'à 30 minutes à 25°C.

J'ai testé hier de l'huile à immersion (je n'avais que ça sous la main) environ 1 cm déposé en surface du milieu réactionnel à t=0. Je n'ai pas observé de différence avec ou sans l'huile alors qu'à priori, en théorie, ça aurait dû être radicalement différent en milieu fermé. S'il y a des subtilités dans la réaction je réfléchirai dessus mais ma question n'est pas là dessus mais simplement sur ma démarche.

Je souhaite donc avoir des avis si possible simplement sur la pertinence de cette démarche : est-ce que de l'huile suffit (je compte acheter de l'huile de vaseline purifiée pour que ce soit plus "propre" (et moins cher)) sur une gamme de temps de 15 à 30 minutes pour limiter la diffusion du dioxygène ? Je n'ai quasiment rien trouvé de rigoureux en biblio là dessus malgré des jours de recherche et au labo personne n'a jamais bossé avec des systèmes de ce genre ; donc s'il y a des gens habitués de la diffusion des gaz dans les huiles je suis preneur ! J'ai pensé à utiliser ça par analogie avec la microbiologie quand on provoque une anaérobiose en milieu de culture liquide dégazé en tube à essai au dessus duquel on dépose une bonne couche (2 cm) de vaseline liquide pour maintenir l'anaérobiose qui peut tenir 24h même pour des anaérobies strictes.

Qu'en pensez-vous ? Ou simplement si vous avez des données d'un handbooks correspondant à la diffusion des gaz dans ce type d'huiles à pression atmosphérique et 25°C je suis preneur aussi bien sûr je ne veux pas que l'on me mâche le boulot je peux faire les calculs moi-même, il me manque essentiellement des données ^^. Moi je n'ai pas trouvé dans les handbooks de physicochimie de mon labo ni dans la biblio.

Merci d'avance si vous pouvez m'aider !

Xavier
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[efouako]

Bonjour Xavier. A mon avis ta réaction consomme des quantités très faibles de dioxygène. Dans ce cas ça ne changera rien que tu aies recouvert le milieu avec de la vaseline ou non. La différence s'observerait seulement si de grosses quantités sont consommées. Dans ce cas l'anaérobiose apportée par la vaseline serait suffisante pour limiter la réaction à un moment donné. J'aurai bien aimé que tu me donnes des détails sur la réaction, ça me permettrait de donner un meilleur avis.

[Sethy]

Sur un forum public, j'éviterais de donner trop de détail de recherche

Pour en revenir au thème initial, je suis d'avis que le problème n'est pas une question de diffusion d'Oxygène. A la limite, si tu veux, tu peux faire la manip sous Argon (avec un ballon de baudruche gonflé à l'Argon) ou sous un léger flux d'Azote. Mais l'huile est largement suffisante. Les données que tu cites concernant les manips en anaérobiose me paraissent logique.

A la limite, tu pourrais faire l'inverse, c'est de faire la manip sous Oxygène pur. Sans huile et avec huile. Et comparer les résultats.

En principe, la concentration en Oxygène dissout devrait être 5x plus importantes. (c'est une simple application de la loi d'Henry).

Tu pourrais vérifier l'hypothèse d'efouako, qui me semble intéressante, de cette manière.

[Boumako]

Bonjour

Pourquoi ne pas simplement utiliser des cuves avec un bouchon ? L'utilisation d'huile présente un risque à mon avis.

[A voir en vidéo sur Futura]

[Xaviser]

Bonjour,

Merci pour vos réponses .

Effectivement efouako et Sethy, je n'ai pas donné de détails sur mon système d'étude mais parlé uniquement "technique" volontairement. Je pense que partager les techniques n'a rien de dommageable à moins que ce soit franchement original ce qui n'est pas le cas !

Boumako, parce qu'il y a de l'air entre la surface de mon milieu réactionnel et le bouchon et la dissolution du dioxygène dans l'eau est relativement rapide donc fausserait mes manips !

Je ne peux pas travailler sous O2 pur je n'ai pas le matériel au labo ! Et il n'est pas temps d'acheter quoi que ce soit d'élaboré quand certains politiques décident de réduire de 67% les crédits de certains labos

Finalement je vais carrément faire le test en mesurant électrochimiquement la concentration en dioxygène en milieu fermé avec de l'huile de vaseline ça me donnera la réponse !

[Boumako]

Boumako, parce qu'il y a de l'air entre la surface de mon milieu réactionnel et le bouchon et la dissolution du dioxygène dans l'eau est relativement rapide donc fausserait mes manips !

Et qu'est ce qui t’empêches de remplir jusqu'au bouchon ?

[Xaviser]

Il est TRES laborieux de produire mon enzyme et c'est aussi très long... Les réactifs sont également chers et la sensibilité du spectro est limitée bien que j'ai la chance qu'il soit très performant (donc je ne peux pas diluer davantage !). De plus il faudrait un bouchon parfaitement étanche (donc pas du parafilm qui est super perméable aux gaz) et des cuvettes adaptées (ainsi que les bouchons) pour ne pas laisser d'espace du tout entre le dessous du bouchon et la surface du liquide. Il faut aussi que je puisse mélanger lors des ajouts successifs de mes composants et je ne peux pas diluer dans un volume important au dernier moment sinon ça ne fonctionne plus... du fait même de la brusque dilution. Et ça coûte aussi très cher si je devais acheter de nouvelles cuves donc le labo ne peut maintenant plus se le permettre. 1 L d'huile de paraffine pure coûte entre 30 et 60 € et il ne faut pas que ça dépasse ça, ce n'est plus possible aujourd'hui, c'est aussi ce qui me fait m'orienter là dessus !

[Boumako]

Désolé d'insister, mais ces arguments me semblent assez peu pertinents :
- Un jeu de cuves avec bouchon coute environ 60 euros (le prix que tu es près à mettre pour ton huile)
- Ce sont des bouchons en PTFE (parfaitement neutres et parfaitement étanches).
- Je ne vois pas ce que le prix des réactifs vient faire la dedans, il faut un volume de cuve dans un cas comme dans l'autre.
- En ce qui concerne le fait de pouvoir mélanger je n'ai pas tout saisi... Tout ce que je sais c'est qu'à partir du moment où tu aura déposé de l'huile sur le sommet de la cuve tu ne pourras plus utiliser son contenu ensuite, ce qui n'arrivera pas si tu utilises un simple bouchon.
Si tu tiens absolument à rester sur ton idée initiale c’est ton droit, mais dans ce cas ne vient pas demander l'avis d'autres personnes si tu ne veux pas en tenir compte.