Concentration d'une protéine par absorbance

[invitee1c1db3d]

Bonjour, je souhaite calculer la concentration d'une protéine pour un exercice. J'ai essayé avec la loi de Beer-Lambert mais il y a quelque chose qui bloque avec les infos qu'on a.
On sait que :
- la protéine contient 5 tryptophanes, 2 tyrosines et 8 leucines
- A=0.6 à 280nm
- cuvette de 1cm
- taille de la protéine = 10kDa
- solution dans 1ml

Calculer la concentration en mg/ml.
J'ai essayé de calculer epsilon par moi même et via un site qui fait le calcul tout seul et on a des résultats différents (et bien sûr le site ne précise pas comment il fait ^^)
aussi je ne vois pas ce que fais la taille de la protéine là-dedans

Voila, pouvez vous m'aider ??

Kévin
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[vpharmaco]

Tu pars de quelques valeurs pour calculer ton coef d'extinction molaire?
Habituellement, on utilise une valeur de 5500 M-1.cm-1 par résidu tryptophane et 1490 M-1.cm-1 par tyrosine, à 280 nm.

Beer-Lambert va te permettre de calculer la concentration molaire de ta solution. Pour déterminer sa concentration en mg/mL, il faut utiliser la masse molaire de la protéine qui t'est donnée

[invitee1c1db3d]

j'ai pris 5690 pour tryptophane et 1280 pour tyrosine (chiffres trouvés sur internet). j'ai refais les calculs avec ces chiffres et je trouve comme sur le site qui calcule automatiquement (j'ai dû faire une erreur tout à l'heure).
Si je comprends bien on ne prend pas en compte les leucines dans le calcul de l'epsilon ?

[vpharmaco]

Effectivement puisque les leucines n'absorbent pas à 280 nm

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitee1c1db3d]

ok merci !