Comment trouver la masse en HPLC ?

[invite0af031b7]

Bonsoir

pourriez vous m'expliquer comment on trouve une masse en hplc sachant que nous n'avons pas connaissance du "m " ainsi que du "% m" ?
Merci d'avance
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[GrimpPhyto]

Salut!

C'est un exercice pratique ou théorique? Si c'est de la pratique et que vous n'utilisez pas de détecteur masse ce n'est pas possible. Si c'est de la théorie, il nous faut plus d'infos.

[HarleyApril]

Bonsoir

Masse moléculaire ou masse présente dans l'échantillon.

Si c'est la masse dans l'échantillon, tu es sans doute en train de faire un dosage. Il y a plusieurs méthodes : étalon interne, étalon externe, ajouts dosés ...

A toi de nous en dire plus

[invite0af031b7]

Alors en faite c'est un exercice pratique pour un projet où il faut trouver la masse de glucose et de saccharose présent dans les jus de fruits ( ex: jus de pomme ) donc nous avons fait une HPLC. Nous avons passer tout d'abord notre solution de glucose et de saccharose et ainsi 3 jus de pomme différent. Le problème c'est que sur les chromatogrammes de nos 3 jus de pommes, nous avons juste le tr ainsi que l'aire, alors comment trouver la masse a partir de ses données ? Où alors peut-il être possible de pouvoir les trouver ( masses ) en utilisant un autre procédé ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[HarleyApril]

Bonsoir

Il s'agit donc d'une titration.
Il te faut réaliser un étalonnage pour terminer.
Une façon de faire est de préparer une solution avec du glucose et du saccharose en quantité connues et proches du titre que tu espères trouver pour tes jus de pommes.
Tu injectes cette solution et mesures les aires. Les aires étant proportionnelles à la quantité, tu fais une règle de trois pour trouver la dose dans tes jus de pomme.

NB, pour être rigoureux, il faut vérifier que tu es bien dans une zone où les aires sont proportionnelles aux quantités. On fait alors une gamme (différentes concentrations) autour de la valeur cible et on vérifie que les aires sont bien proportionnelles aux quantités.

Bonne continuation

[invite0af031b7]

Bonsoir,
Qu'est ce qu'un étalonnage ?
Voici ce que j'ai comme données. Donc comment puis je réaliser mon calcul afin de trouver la masse ? Merci


m % m tr aire
E ? ? 2.87 146.99
P ? ? 3.84 327.60

[invite0af031b7]

Bonsoir
Il n'est pas possible de faire un étalonnage car nous n'avons pas hplc !

[mach3]

Vous avez analysé une solution de glucose. Connaissez vous sa concentration? Quel est l'aire mesurée? Quelle est la relation entre l'aire et la concentration?
Vous avez analysé une solution de saccharose. Connaissez vous sa concentration? Quel est l'aire mesurée? Quelle est la relation entre l'aire et la concentration?

m@ch3

[invite0af031b7]

Bonjour concernant les calculs pour l'HPLC j'ai réaliser les calcules suivant :
A1 ----> C1
At ----> Cx Sachant que C1 = concentration de saccharose en g / L
A1= l'aire du saccharose ( témoin )
At = l'aire du saccharose dans le Tropicana
Cx = concentration a déterminer, chercher de saccharose présent dans le Tropicana
puis ensuite faire un produit en croix donc :

Cx = ( At * C1 ) / A1
Cx = ( 327.6 * 150) / 10.74

mais le problème c'est que le résultat est ahurissant !!!
après je pense que sa viens peut être de la concentration que je devait calculer puisque j'ai fait :

150 / 100 = 1.5 ensuite 1.5 / ( 10 . 10-3 ) = 150 g/L car nous avons dilué 10 fois notre solution

Est-ce que vous pourriez me dire se qui ne va pas suivant la démarche que je viens de démontré si cela ne vous dérange pas, s'il vous plaît .

Merci d'avance

[HarleyApril]

Bonsoir

La démarche est la bonne
Si tu dilues dix fois, la concentration initiale était dix fois celle que tu mesures.

Ce qui est peu usuel, c'est que la concentration du témoin est loin de celle de l'échantillon (vu les aires que tu utilises). Normalement, on se place dans des valeurs voisines.

Cordialement

[invite0af031b7]

Merci de votre réponse, mais que voulez-vous dire " se place dans des valeurs voisines" ? Pourriez-vous me donner un exemple ?


Cordialement

[vpharmaco]

150 / 100 = 1.5 ensuite 1.5 / ( 10 . 10-3 ) = 150 g/L car nous avons dilué 10 fois notre solution

Il n'y a rien qui te choque ? Tu prépares une solution à 1,5 g/L (150 mg dans 100mL). Tu la dilues 10 fois et tu retrouves avec une concentration à 150 g/L (100 fois plus concentrée !)

[Kemiste]

mais que voulez-vous dire " se place dans des valeurs voisines" ? Pourriez-vous me donner un exemple ?

On doit avoir des aires similaires entre la solution de référence et la solution à analyser. Vu qu'il n'y a pas de courbe étalon, rien ne nous dit que l'on soit dans le domaine de linéarité.

[invite0af031b7]

Ah oui la concentration à 150 g/L ne vous inquiété pas je m'en suis rendu compte et j'ai du refaire le calcul mainte et mainte fois et que le résultat était le même, mais alors comment devrais-je faire car mon résultat final pour la concentration de saccharose dans le Tropicana est de 4575.4 g/L !!!!
( si j'applique la formule précédemment expliquer un peu plus haut )

[Kemiste]

Quels sont les volumes injectés ?

[invite0af031b7]

donc en faite nous avons réalisez une solution témoin ( étalon ) de saccharose où nous avons mis 150 mg de saccharose dans une fiole de 100mL puis nous l'avons dilué ( complété ) avec de l'eau distillé jusqu'au trait de jauge.
Mais ensuite nous avons du dilué par 10 cette solution donc nous avons prélevé 1mL de notre ancienne solution puis nous l'avons introduit dans une fiole de 10 mL puis nous l'avons dilué avec un mélange eau/acétonitrile

10.10(-3) = fiole de 10mL

[invite0af031b7]

Euh au faite vpharmaco, vous pensez qu'il y a une erreur de calcul, car cela est vrai que c'est étrange ?

[Kemiste]

Quels sont les volumes injectés en HPLC ? Se sont les mêmes volumes à chaque fois ?

[invite0af031b7]

10 mL pour tous

[Kemiste]

Tu es sûr que tu as injecté 10 mL sur la colonne ? En général, en analytique, l'ordre de grandeur du volume d'injection est la dizaine/centaine de µL.

[vpharmaco]

Euh au faite vpharmaco, vous pensez qu'il y a une erreur de calcul, car cela est vrai que c'est étrange ?

On va reprendre les bases...
Si tu as une solution de concentration à 10 g/L et que tu la dilues 10 fois, quelle va être la concentration de la solution obtenue ??
Reste à faire la même chose à partir d'une solution à 1,5 g/L puis reprendre les calculs.