Bonjour,
J’ai du mal avec cet exercice. Je voudrais savoir comment déterminer la concentration et la masse d’une protéine avec comme seules données ses absorbances ?
On connaît la loi de Beer-Lambert. A = E x l x C
Donc C = A / (E x l)
Mais à partir de là, je bloque. Je n’ai ni Epsilon, ni l.
Si vous pouviez m’aider je vous en remercie !!
Bonjour,
Il te faut trouver un moyen de te procurer le coefficient epsilon, ou de le calculer avec une expérience dont tu connaisses la concentration et l'absorbance.
J’ai fait une gamme étalon juste avant avec comme longueur d’onde A750nm. J’ai utilisé pour l’expérience Dont je vous parle A750nm aussi.
Est-ce que c’est possible de trouver la masse a partir de cette gamme ? (C’est A750nm = f(quantité de sab)
Bonsoir,
L'important n'est pas de connaître la longueur d'onde. L'important est de connaître la concentration et l'absorbance, mesurée à la même longueur d'onde que les autres mesures. Parce que le coefficient epsilon que tu cherches est le rapport de ces deux valeurs numériques.
Merci de vos réponses.
Mais justement je cherche à déterminer la concentration.
Je ne vois pas comment faire.
De plus je ne peux pas avoir epsilon si je n’ai pas la concentration..
Je dispose juste d’une droite représentant l’absorbance a 750nm en fonction de la quantité de protéine qui correspond à une autre expérience
Comment calculer Epsilon sans avoir la concentration ? Sinon je peux le calculer si j’ai une autre expérience où l’on a la concentration et l’absorbance ?
Pour déterminer la concentration d'une solution par dosage colorimétrique, on peut utiliser la loi de Beer-Lambert ou réaliser une gamme d'étalonnage. Ici, c'est clairement la deuxième méthode qui a été employée, donc pas besoin de calculer epsilon. A partir des données d'absorbance et de concentration obtenues pour les solutions avec différentes quantités de protéine, il suffit de déterminer l'équation de la droite ainsi obtenue. Et à partir de là, il ne reste plus qu'à utiliser cette équation reliant l'absorbance à la concentration en protéines pour calculer la concentration de la solution étudiée.Envoyé par juliavengers
D’accord merci beaucoup !!
Désolée de ne pas avoir été plus claire sur l’énoncé au début.
Je vais essayer cette méthode !
A noter que le coefficient de la droite obtenue par étalonnage correspond à l'epsilon (multiplié par la longueur de la cellule qui la plupart du temps vaut 1 cm).
