Effet du beta mercapto-ethanol en electrophorese

[invite28a020a7]

Bonsoir,

j'ai une question assez urgente concernant l'effet du beta mercapto-ethanol sur l'electrophorese.
Après une electrophorese SDS page sur gel polyacrylamide réalisé, (avec du beta mercapto-ethanol) je trouve la masse moléculaire de la protéine (la beta-gal) = 36kDa
maintenant on me demande de calculer sa masse si on avais réaliser l'electrophorese sans beta mercapto-ethanol.

Le beta mercapto-ethanol réduit les pont dissulfure, donc l'electrophorese sépare les protéine en fonction de leur taille. Mais si ce beta-mercapto n'est pas présent les protéines migreront aussi en fonction de leur forme.

Du coup je ne vois pas comment calculer précisément cette masse puisqu'elle dépend de la forme de la protéine.

merci pour ceux qui prendront le temp de me lire et me répondre,
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[Sethy]

On est quand même assez loin de la chimie, mais je vais essayer de t'aider.

Quel est l'effet des ponts disulfures sur la taille des protéines ? Est-ce qu'ils les allongent ou au contraire est-ce que ces liens font que la structure se replie sur elle-même ?

Si on applique une méthode de mesure alors que la taille est modifiée par ces ponts, est-ce que cela n'entache pas la mesure ?

Dès lors, rompre ces liens semblent une bonne idée.

[invitef9ff08f2]

Ca me rappel un TP d'enzymologie en L2...

Sethy t'a quasiment donné les réponses à ta question.

Niveau biologie structurale, la b-gal fait 464 kDa et est composée de 4 sous unités (homotétramère)... de plus, les protéines ne sont jamais sous forme de chaîne polypeptidique, il y a toujours une structure tertiaire voire quaternaire (assemblage de plusieurs sous unités), comme c'est le cas pour la béta-gal. Les sous unités sont reliées par deux cystéines qui engagent leur atomes de souffre dans un pont di-sulfure.

Comme tu l'a dis le b-MeOH rompt les ponts di-sulfure... qu'est-ce que cela induit sur la structure natale de ta protéine ?