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Force eluante et utilisation de l'eau en HPLC



  1. #1
    Kowabunga

    Force eluante et utilisation de l'eau en HPLC


    ------

    Bonjour,

    J'aimerai confirmation (ou non), de ce que j'ai compris.

    Je suis en phase inverse en Hplc avec une phase H2O/Meoh.

    Déjà en phase inverse si la force eluante d ela phase mobile augmente, cela fait diminuer le temps de retention non ?

    Et dans le cas du mélange si j'augmente la proportion d'eau, j'augmente la force eluante du mélange non ? (j'ai vu que la force eluante de l'eau était la plus forte)

    Desole pour ces questions bêtes mais je me replonge en profondeur dans les théorie de l'HPLC

    Merci

    Cordialement

    -----

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  3. #2
    HarleyApril

    Re : Force eluante et utilisation de l'eau en HPLC

    Bonjour

    Qu'est-ce que tu entends par force éluante ?
    Si c'est la capacité du solvant à faire diminuer le temps de rétention, alors plus il y a de méthanol, plus c'est fort en phase inverse (ce serait le contraire en phase normale ... si on utilisait MeOH/H2O)
    Si c'est la polarité du solvant, alors plus il y a de méthanol, moins c'est polaire, c'est plus lipophile et donc ça décroche mieux les molécules des greffons lipophiles de la phase stationnaire.

    Bonne continuation

  4. #3
    sfnsfn2

    Re : Force eluante et utilisation de l'eau en HPLC

    [(ce serait le contraire en phase normale ... si on utilisait MeOH/H2O)]
    Peut-être ce mode s'appelle HILIC, chromatographie d'interactions hydrophiliques.
    qui se ressemble s'assemble (Homère)

  5. #4
    Kowabunga

    Re : Force eluante et utilisation de l'eau en HPLC

    Merci pour vos réponse,

    Donc en gros si j'ai bien compris, en phase inverse si le % de Meoh augmente, plus la phase mobile devient apolaire donc plus le temps de retention des solutés baisse ?

    Merci

  6. #5
    GrimpPhyto

    Re : Force eluante et utilisation de l'eau en HPLC

    Bonjour,

    Pour comprendre facilement l'HPLC, il faut penser que plus un composé sera proche des caractéristiques de ta phase stationnaire plus il sera retenue par elle.

    Par exemple en phase inverse, la phase mobile est POLAIRE et la phase stationnaire est APOLAIRE.
    Si ta molécules est POLAIRE, elle aura une plus forte affinité avec la phase mobile, elle sera donc éluée rapidement.
    Si ta molécules est APOLAIRE, elle aura une plus forte affinité avec la phase stationnaire, elle sera donc retenue plus longtemps.

    Maintenant, si tu diminues la polarité de la phase mobile avec un solvant plus "APOLAIRE", ta molécule va petit à petit avoir une affinité plus forte avec la phase mobile et donc être éluée. C'est pour ça que l'on travail généralement en gradient, à 95% d'eau 5% MeOH une molécule APOLAIRE reste dans le colonne, à 10% d'eau 90 % MeOH elle est éluée.
    Dernière modification par GrimpPhyto ; 06/02/2020 à 12h56.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Kowabunga

    Re : Force eluante et utilisation de l'eau en HPLC

    Bonjour,

    Merci pour la réponse c'est déjà beaucoup plus clair 😊

    Une dernière question, si j'ai par exemple un chromatogramme avec un pic de soluté et que l'on me demande l'impact sur le chromato si on augmente le ratio d'eau dans la phase mobile (en phase inverse)

    Si on ne connaît pas la polarité de la molécule on ne peut pas savoir dans ce cas ? Car si molécule plus apolaire alors le TR augmentera non et inversement si la molécule est polaire ?

    Merci pour toute cette aide

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  10. #7
    HarleyApril

    Re : Force eluante et utilisation de l'eau en HPLC

    Bonsoir

    Si, on peut répondre.
    S'il y a plus d'eau, la molécule aura plus envie de rester sur la phase stationnaire (elle a une certaine affinité pour ladite phase puisqu'elle est déjà retenue).

    Cordialement

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