Hplc

[invite4edb25b4]

Bonjour,

Je suis stagiaire et je travaille actuellement sur un sujet pour lequel je dois séparer des copolymères statistiques avec une HPLC.
Je pense effectué une chromatographie en phase inverse avec surement une C18 pour phase stationnaire. Pour le moment, je compte utilisé comme phase mobile un mélange de THF/ eau et voir par la suite si je reste sur ce choix ou non. Cependant je bloque un peu sur la réalisation de mon gradient, comment optimiser le choix du gradient?

Pouvez vous m'aidez svp
Bonne journée
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[invitecd291faa]

Bonjour,

Tout d'abord connais-tu la nature des copolymères ou ils restent inconnus avant séparation ? Si tu ne connais pas leur nature alors une chromato en phase inverse avec une PS en silice C18 serait le mieux en effet.
Concernant la phase mobile, le THF est très bien comme solvant organique mais attention car il a tendance à former des peroxydes explosifs quand il n’est pas stabilisé et est plus difficile à dégazer...(même si moins cher que l'acétonitrile).
Pour le gradient, dans le cas d'un mélange THF/Eau, généralement la phase mobile sera au départ très peu éluante (tu auras un rati à 20/80 en THF/Eau par exemple) puis la force éluante augmentera progressivement (jusqu'à 70/30 par exemple en THF/Eau). Généralement la composition finale de la phase mobile est choisie pour garantir une élution de tous les composés avec une résolution optimale et dans un délai raisonnable.

Pour optimiser ton gradient, tu peux faire des essais en mode isocratique avec différentes proportions en THF/Eau pour observer l'influence de chaque essai sur la sélectivité du mélange. Par exemple, si tu vois qu'avec un ratio 70/30 THF/Eau en mode iso tu as de plutôt bons résultats MAIS qui restent optimisables, tu peux faire un gradient 0-60 en THF sur un certain temps (temps choisis en fonction du dernier composé élué sur le chromatogramme).

Je reste disponible bien évidemment.

[invite4edb25b4]

Bonjour,
Je vous remercie pour votre réponse très complète. Du coup, préférentiellement il faudrait que j'utilisé de l'acétronitryle avec de l'eau? Et en ce qui concerne la nature des polymères, je les connais mais malheureusement je ne peux pas vous les communiquez, ils sont confidentiels

[invitecd291faa]

Le mélange THF/Eau reste bien, pas besoin de modifier la PM, le THF reste un très bon solvant organique.
Concernant les polymères, tant que tu connais leur structures et leur données physico-chimiques alors je peux te donner ces indications :
-Si tes échantillons ont un poids moléculaire < 5 000 et sont solubles dans l'eau : phase inverse
-Si tes échantillons ont un poids moléculaire < 5 000 et sont solubles dans les solvants organiques : phase normale
-Si tes échantillons ont un poids moléculaire > 5 000 et sont solubles dans l'eau : phase inverse ; échange d'ions ; filtration de gel...
-Si tes échantillons ont un poids moléculaire > 5 000 et sont solubles dans les solvants organiques : perméation de gel

A voir bien sûr avec le matériel possible à ta disposition

N'hésites pas à me redemander si tu as besoin d'aide pour la réalisation de ton gradient !

[A voir en vidéo sur Futura]