Dosage des phénols totaux

[papillon de mer]

Salut,
J'ai essayé de faire le test qui quatifie le contenu en phénol totaux, j'ai préparé la solution d'acide gallique en différente concentraton, et on ajoute le folin ciocalteu et le bicarbonate de sodium. On fait la lecture à 765nm.
Dans la bibliographie, je trouve que le folin réagit avec le phenol, et le produit avec coleur bleu absorbe à 765 nm, mais lorsque je trace le spectre je trouve que l'absorbance est dans l'interval uv entre 200 et 300nm et il n y pas d'absorbance dans l'interval visible. Aussi, j'ai obtenu le même absorbance avec la solution d'acide gallique sans réactif. Donc, ma question est pourquoi on n'a pas obtenu une absorbance à 765nm dans le spectre et quelle est la role de réactif, si on obtient une absorbance avec l'acide gallique sans réactif?
Merci d'avance
-----

[Baal149]

Bonjour,

As tu un protocole pour utiliser le réactif de Folin ?
De plus, si ton mélange final à la même absorption que ton produit de départ, c'est qu'il ne s'est rien passé ...
As tu observé un changement de couleur (visible à l'oeil) de ton réactif de Folin ?
Autre possibilité, tu n'as pas mis assez de réactif. Est ce qu'il n'y a rien à la longueur d'onde attendue ou c'est très faible ?
De plus, je vois d'autres longueurs sur internet (750 parfois 650 nm) comme valeur d'absorption max. Comme je ne connait pas ce réactif, je ne saurais te dire ce qui est juste, mais vérifies bien si c'est correct ou non ? (quel protocole t'utilises ?)

[papillon de mer]

As tu un protocole pour utiliser le réactif de Folin ?

Oui

As tu observé un changement de couleur (visible à l'oeil) de ton réactif de Folin ?

Oui, j'ai observé la couleur bleu, ce qui absorbe normalement à 765nm.

Autre possibilité, tu n'as pas mis assez de réactif. Est ce qu'il n'y a rien à la longueur d'onde attendue ou c'est très faible ?

Il y a rien à la longueur d'onde attendue

[gts2]

Bonjour,

Si vous avez mis une solution de couleur bleue dans le spectro, vous ne pouvez avoir un spectre plat.

Donc c'est un problème pratique : confusion entre deux flacons, erreur dans le mode d'emploi du spectro, spectro en panne ...

[A voir en vidéo sur Futura]

[papillon de mer]

Si vous avez mis une solution de couleur bleue dans le spectro, vous ne pouvez avoir un spectre plat.

C'est à dire il faut obtenir un pic dans l'intervall visible?

Donc c'est un problème pratique : confusion entre deux flacons, erreur dans le mode d'emploi du spectro, spectro en panne ...

J'ai essayé de tracer un spectre pour le DPPH ce qui absorbe à 517nm, il a été bien, donc il n y pas erreur dans le mode d'emploi du spectro, mais pour le complexe bleu je n'obtiens aucun pic dans l'intervall visible et il n'y a pas confusion entre deux flacons parce que j'ai seulement préparé ces échantillons pour tracer la courbe d'étalonnage

[gts2]

Pour le DPPH, visuellement c'était nettement plus foncé que le bleu ou non ? Ordre de grandeur de l'absorbance max ?
Une photo de la solution bleue (pour répondre à la question de @Baal49 : "Autre possibilité, tu n'as pas mis assez de réactif.")
Sensibilité du spectro, type du spectro ? Parce que même un bleu pâle, cela se voit au spectro.

Si la solution est colorée, l'absorption dépend de la longueur d'onde, donc cela ne peut être plat.

[gts2]

pour le complexe bleu je n'obtiens aucun pic dans l'intervalle visible.

Un image du spectre ?

[Baal149]

En complément de ce qui a été dit : vu que tu utilises des solutions en quantités de matière connues, as tu calculé la quantité de réactifs qu'il te faudrait utiliser ?
La réaction étant stœchiométrique (je ne saurais dire combien d'équivalent il faut), la quantité doit être plus importante.

[papillon de mer]

Un image du spectre ?

Pièce jointe 0

Le spectre vert est pour le réactif folin ciocalteu avant de réagir et transformer en complex bleu

[papillon de mer]

En complément de ce qui a été dit : vu que tu utilises des solutions en quantités de matière connues, as tu calculé la quantité de réactifs qu'il te faudrait utiliser ?
La réaction étant stœchiométrique (je ne saurais dire combien d'équivalent il faut), la quantité doit être plus importante.

No, mon échantillon est un extrait, donc je ne connais pas la quantité de matière des composés contenus, et je ne peut pas calculer la quantité de réactif, juste je respete le protocol.

[gts2]

Le spectre vert est pour le réactif folin ciocalteu avant de réagir et transformer en complexe bleu

Un clic sur la pièce jointe donne une page vide.

[papillon de mer]

Le spectre vert est pour le réactif folin ciocalteu avant de réagir et transformer en complex bleu

[agitateur]

et les autres courbes ?

[gts2]

En dehors de la courbe témoin (verte), on a bien un maximum aux alentours de 765 nm (rouge, bleue, noire).