Choix phase mobile et stationnaire

[Lola1103]

Bonsoir
Je n'arrive pas à comprendre comment se fais le choix de la phase stationnaire et de la phase mobile en chromatographie (par exemple liquide).
Par exemple dans une chromatographie liquide j'ai la phase stationnaire : gel de silice octadécylsilylé postgreffé pour chromatographie R à particules sphériques, et une phase mobile A : acétonitrile R1, solution tampon (7:39 V/V) et une phase mobile B : solution tampon, acétonitrile R1 (43:57 V/V)
Pouvez-vous m'éclairer sur le choix de ces phases?
Merci.
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[moco]

Pourquoi y a-t-il deux phases mobiles ? Normalement, dans une chromatographie quelconque, on remplit le tube (capillaire ou non) avec une phase stationnaire, et on fait passer une phase mobile (et une seule) à travers le tube de chromatographie. Mais ici il y a deux phases mobiles... Pourquoi ? Quant au problème du choix de telle ou telle phase, c'est l'expérience qui décide. En mettant au point la méthode de séparation, on essaie plusieurs phases stationnaires et plusieurs phases mobiles. On regarde quel choix conduit à la meilleure séparation. Et c'est tout

[mach3]

Tout dépend de ce que l'on veut séparer.

La phase stationnaire décrite est plus communément appelée "C18", et c'est un grand classique. Elle a une très forte affinité pour les composés apolaires. Les composés polaires seront peu ou pas retenus et les composés apolaires seront très retenus. Il faut mettre en face une phase mobile polaire (si on met une phase mobile apolaire, les composés auront la même affinité pour la phase stationnaire et la phase mobile et il n'y aura plus de séparation). Généralement un mélange eau/acétonitrile ou eau/methanol.
On mettra souvent une solution aqueuse tampon à la place de l'eau si certains analytes ont des propriétés acido-basique, en effet les différentes formes (acide libre, base conjuguée ionisé, ou l'inverse) ne seront pas retenues de la même façon et fixer le pH est alors nécessaire.
Souvent on travaillera en gradient, c'est à dire que la composition de la phase mobile va évoluer au cours de l'analyse. En pratique on aura deux phases mobiles, l'une plus polaire que l'autre et la pompe les mélangera à différents ratio pendant l'analyse. On commence par du polaire (la phase A dans votre exemple), avec lequel les analytes iront très lentement mais avec des vitesses très différentes, ce qui les séparera nettement, puis on diminue la polarité afin de faire sortir tous les analytes sur une durée raisonnable sans pour autant dégrader la séparation.

Si la phase stationnaire est apolaire (comme la C18) et la phase mobile polaire, on parle de chromatographie liquide en phase inverse. C'est le répandu en HPLC et c'est ce qui sera testé en premier, en commençant par la C18.
Si la phase stationnaire est polaire (généralement de la silice pure) et la phase mobile apolaire, on parle de chromatographie liquide en phase normale. C'est la première historiquement et c'est la plus utilisée à des fins préparatives. En effet, le volume de phase stationnaire à utiliser est alors important, donc elle ne doit pas être couteuse si possible (la silice greffée coute beaucoup par rapport à la silice pure).

m@ch3