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Electrohproèse acides nucléiques Agarose



  1. #1
    emce

    Electrohproèse acides nucléiques Agarose


    ------

    dites, nous avons un ptit soucis...
    lors de notre électrophorèse d'acides nucléiques sur gel d'agarose 2% nous

    avons mis du bromure d'éthidium dans le gel (TAE+ Agarose)

    mais pas dans le tampon de migration (TAE), - sous indication de l'assistant-

    contrairement à ce qui était indiqué dans le protocole de départ...

    L'assistant ne nous ayant pas dit pourquoi je lance un sos cri de désespoir: qu'a
    ce bromure d'éthidium comme effet sur la migration???


    Merciiii
    Em+Cé

    -----
    Em+Cé ou Le doute + L'incompréhension ;-)

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  4. #2
    LaBrindille

    Re : Electrohproèse acides nucléiques Agarose

    Le bromure d'Ethidium est un agent intercalant. Ca signifit qu'il peut s'intercaler entre deux paires de base de l'ADN.
    Dans ton cas le Bromure d'Ethidium (ou BEt) va donc migrer avec tes acides nucléiques. Tu as ensuite du révélé ton gel en l'exposant à des UV, ce qui rendu le BEt orangé, te permettant de situer tes acides nucléiques.

  5. #3
    t0yt0y

    Re : Electrohproèse acides nucléiques Agarose

    Oui, en effet, le bromure d'éthydium est un agent intercalent qui permet de reveler l'ADN.

    Ce qui faut prendre en compte, dans le cas ou avant de faire migrer ton ADN, tu le soumets au BET, c'est qu'en s'intercalant, le BET augmente le pas de ta double hélice, change donc sa longueur (physique) et à mon avis, peut interferer dans tes résultats.

    Après si ton PM a lui aussi été soumis au BET a priori c'est peut etre bon et tu retombes sur de bonne valeur.
    Allo, Stérique ?! Oui ... Ici Nétique !!!!

  6. #4
    MaliciaR

    Re : Electrohproèse acides nucléiques Agarose

    Bonjour,

    Ce fil existe avec précisément la même question en Bio... Où on a longuement répondu...


    Cordialement,
    An expert is one who knows more and more about less and less.

  7. A voir en vidéo sur Futura

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