Bonjour,
Je travaille sur un TPE concernant l'ADN et la police scientifique.
Je sais que celle-ci utilise l'électrophorèse. J'ai comprise le principe de cette méthode mais je me pose des questions ?
- Après la PCR, le "séquençage" grâce aux enzymes de restriction est-il obligatoire ?
- A quoi est du la ionisation des fragments d'ADN lors de l'électrophorèse ?
- Et après l'électrophorèse que se passe-t-il ?
Merci
Alors quelques précisions,
- La PCR permet d'amplifier un échantillon d'ADN (ou d'ARN en cas de RT-PCR). En effet la quantité d'ADN prélevée n'est pas forcément suffisante pour effectuer des analyses.
- Les enzymes de restrictions vont cliver (couper) les brins d'ADN sur des séquences spécifiques. Elles permettent d'établir une "carte de restriction" qui est propre à chaque individu, et non un séquençage comme tu l'as dit.
- Pour visualiser les fragments d'ADN, analyser leur taille en paire de bases (pb) et établir la carte, il faut effectuer une migration électrophorétique sur gel d'agarose.
Cela consiste à faire migrer les fragments d'ADN dans un gel selon leur taille. Pour cela on utilise la caractéristique naturelle de l'ADN d'être chargé négativement. La méthode est une forme de chromatographie si tu préfères.
L'ADN subit préalablement un traitement au Bromure d'EThidum (BET) qui est visible sous UV. Cela permet de révéler les fragments après migration.
- Après migration, l'analyse commence. Grâce à la migration d'un echantillon connu, les techniciens établissent la courbe étalon Log(taille de l'ADN) = f(mobilité relative). En reportant la mobilité relative de l'échantillon à analyser sur la courbe, il est possible d'en déduire la taille de chaque fragments d'ADN.
Pour plus d'infos, recherche "migration électrophorétique" sur Google, ya des sites qui sont bien faits.
Il me semble avoir donné les infos importantes, si quelqu'un voit d'autres trucs a ajouter...
J'ai rechercher en profondeur et j'ai trouvé autre chose !
Apparement, la police scientifique utilise les microsatellites.
A partir de l'aDn recolté, la PS emplifie les microsatellites par PCR puis utilise l'electrophorese capillaire.
Qu'en penses-tu ?
Merci en tout cas de ta réponse !
