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centrifugation différentielle, peroxisomes



  1. #1
    pierkiroul

    centrifugation différentielle, peroxisomes


    ------

    Bonsoir,
    J'aimerais savoir quels sont les compartiments de la cellule qui tombent avec une centrifugation à 2000G. Ok pour le noyau, membranes et cellules entières, mais est-ce aussi le cas des peroxisomes??
    Parce que j'ai fait un Tp où on doit repérer une proteine par immunofluorescence, sur les photos tirées du microscope à fluorescence non confocal, la proteine serait plutôt dans le cytoplasme, peut-être sous forme de vésicules parce que c'est pas très homogène.
    On casse les cellules et on fait des centrifugation différentielles, celle à 2000G sépare le culot C1 du surnageant S1. Par analyse avec le Western Blot, avec les Anti-corps dirigés contre ma proteine, on voit que la proteine recherchée est dans la fraction C1.
    Je mets en lien une des photos obtenues. Les cellules sont des fibroblastes BHK21.
    Merci, Neurostone

    -----
    Images attachées Images attachées  

  2. #2
    MaliciaR

    Re : centrifugation différentielle, peroxisomes

    Salut,
    il est spécial, ton C1...
    Normalement, quand tu centrifugies à cette vitesse (ce n'est pas beaucoup, 2000 g; à 5-10min?), tu culottes les débris cellulaires et les noyaux.
    Si tu veux culotter les mitochondries, lysosomes, peroxysomes, il faut aller à 20 000 g et plus si je ne m'abuse (on parle carrément d'ultracentrifugation là).

    Si tu trouves ta protéine dans le culot (C1), je penserais plutôt à des corps d'inclusion... C'est que ta protéine est en état insoluble (car se retrouve dans ces corps) d'où sa présence dans le culot.
    Vous avez fait un traitement à l'urée de se culot?

    Si je dis des bêtises, merci aux autres de me corriger

    Cordialement,
    An expert is one who knows more and more about less and less.

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