vecteur

[MELISAB]

bonjour,
comment voit on quand les Extremités cohesives ne sont pas compatibles entre le vecteur ouvert et un fragment?Pouvez vous me donner un exemple ?car j ai du mal a comprendre ca svp
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[MaliciaR]

Je ne suis pas vraiment sûre de comprendre ta question...
Si tu veux bien expliciter

Cordialement,

[MELISAB]

j ai une serie 6 enzyme de restriction et on me demande comment faut il preparer le plasmide,par que enzyme de restriction parmi les 6(bsrDI?BSAL?ASEL?ECORI?BAMHI? PSTI) ,et en fait j aimerai savoir comment voit on quand il y a incompatibilite entre les extremite cohesive d un fragment digéré par une enzyme (dans mon cas c est NDei)et un plasmide ouvert

[Yoyo]

salut

c'est tout simple si les extremites sortantes sont complementaires alors c compatibles.

genre: G^AATTC (ou ^represente le site de clivage)
est compatible avec une enzyme qui couperait un site comme : C^AATTG
mais pas avec une enzyme qui couperait GA^ATTC ou TGG^CCA ou G^GGCCC

YOyo

[A voir en vidéo sur Futura]

[b_h]

PRÉPARATION DES PLASMIDES:
Les bactéries contenant les plasmides sont mises en culture dans un grand volume (jusqu’à 2 litres de milieu de culture). Quand la concentration bactérienne atteint une valeur suffisante, on traite par un antibiotique (comme le chloramphénicol) qui empêche la croissance bactérienne sans affecter la réplication des plasmides. On récupère les bactéries par centrifugation. Puis, on perméabilise la paroi bactérienne par un traitement doux permettant d’obtenir un passage en solution des plasmides qui sont plus légers que l’ADN bactérien. La purification des plasmides peut être ensuite réalisée par chromatographie liquide à haute performance ou ultra-centrifugation en gradient de densité.

- Préparation des plasmides pour la recombinaison, constitution de L’HYBRIDE ET transformation bactÉrienne.

L’insertion d’une séquence d’ADN bicaténaire dans un plasmide nécessite un traitement préalable par une enzyme de restriction. On choisit une enzyme qui a un site unique dans la séquence plasmidique. Après action de l’enzyme de restiction, le plasmide circulaire est linéarisé. Pour maintenir la linéarisation, il est indispensable de traiter le plasmide linéaire par une phosphatase alcaline qui enlève les groupements phosphates en 5’. Le plasmide linéarisé et traité par une phosphatase alcaline est ajouté au fragment d’ADN à insérer en présence d’une ligase. L’ensemble de ces étapes produit un plasmide recombinant.

Les bactéries peuvent être placées dans certaines conditions physico-chimiques pour permettre aux plasmides d’être incorporés à l’intérieur de celles-ci. Les bactéries traitées et prêtes à recevoir l’ADN étranger sont appelées bactéries compétentes. L’incorporation des plasmides dans les bactéries est appelée transformation bactérienne.

[MELISAB]

merci beaucoup