j'utilise un plasmide pET 28a pour faire un clonage chez coli mais les différente digestion de ce ce plasmide par EcoR1 Hind3 Xba1 Kpn1 incuber plus ou moins longtemps ne me permette pas d obtenir une digestion correcte. quelqu un a déjà eu ce genre de résultats? comment y palier? comment l'interpréter?
si je purifie la bande digéré sur gel les ligations avec mon insert ne fonctionne plus.....
Bonjour,
Une photo de votre gel pourrait nous aider à vous répondre.
Cordialement,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
désolé je n ai pas de version numérique de mes gel (que des photo).
sur le gel on voix qu'il y a une bande correspondant à du plasmide non digéré.
y aurait il une conformation particulière de ce plasmide le rendant non accessible aux différentes enzymes testées?
ou un autre plasmide possédant des site nde1 xho1 avec un tag his et utilisable chez bl21de3?
Salut,
J'utilisais le même plasmide (et les mêmes cellules d'expression).
Tu ne dois pas avoir de soucis particuliers pour les digestions.
Quels sont les contrôles que tu as faits pour dire que ce plasmide n'est pas digérable...?
Sinon, tu peux utiliser pET24 aussi
Cordialement,
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