Dosage protéines dans du glycérol ?
Salut
J'ai un problème : on m'a donné un tube d'anticorps (sérum immunopurifié) qui m'intéresse beaucoup mais je ne sais pas quelle est la concentration précise en anticorps (on m'a dit entre 100 et 500µg/mL, c'est large) et j'en ai besoin.
Le problème c'est que l'anticorps est en solution dans 50% glycérol et que mon Bradford préfére ne fonctionne pas dans ces conditions.
Comment doser mes anticorps ?
Merci de votre aide
Salut!
Pas trop d'idées désolé (en fait, j'ai regardé dans le Kit de dosage BCA de chez Pierce, et la limite est fixée à 10% pour le glycérol...).
Est-ce que tu as vraiment besoin de doser ton anticorps ? Si c'est pour faire un western, tu peux toujours faire une gamme avec plusieurs volumes d'anticorps pour avoir une idée de la quantité optimale. Ca ne va pas te donner la concentration mais tu pourras toujours faire des belles choses avec.
FX
oui j'avais pensé à faire un western, mais dans l'idéal je cherchais un ptit test biochimique moins long !
je vais tenter de faire un BCA en diluant suffisamment pour avoir moins de 10% de glycérol final, en espérant encore avoir une absorbance détectable
merci !
Tu peux diluer tes échantillons pour diminuer la concentration de glycérol. Le pb, c'est que tes anticorps seront aussi dilués, donc il ne faut pas trop diluer. Pour ta gamme, fait la dans les mêmes conditions, c'est à dire avec les mêmes concentrations d'anticorps.
sinon tu déposes un gamme d'anticoprs de concentration connu, et ton anticorps (a différentes concentration) . tu fais une coloration au coomassie, et tu compares l'intensité des bandes au densitomètre.
Je vais essayer mon BCA avec les échantillons dilués et si ça ne marche pas, j'utiliserai effectivement un gel
thanx
Le BCA avec dilution pour avoir moins de 10% (5µL de solution protéique + 45µL ddH2O) de glycérol a marché. Malheureusement, y a pas beaucoup d'anticorps dans ce tube !
Merci encore
A+
