Au sujet des isotypes de contrôle !!
bonjour !
je suis étudiante en thèse et je suis moi aussi en train de m'initier à la cytométrie de flux et je trouve bcp de difficultés à justifier au prés de mon directeur de thèse l'importance d'utiliser (et donc d'acheter ) des anti corps de contrôle pour chaque marquage surtout qu'il à bien vu une énorme différence ds l'intensité de marquage quant je passe le même tube sans avoir passé le tube contrôle et aprés l'avoir passé.
merci de m'éclaircir sur le sujet !!
Tout depend de ce que tu veux etudier. En effet si il ne s'agit pour toi que de differencier des populations, tes isotopes controles ne sont pas necessaires.
Donc avant de rentrer dans le vif du suet, qu'etudies tu avec le flow?
bonjour!Envoyé par spillou
avec le flow , j'essaye de voir l'activation des cellules Treg au niveau de dif organnes ( rate, thymus, Mo...) chez la souris aprés irradiation et traitement, et jutilise comme marqueurs les anticorps: CD4, CD25 et le Foxp3
bien que je ne sois pas trés convaincue du Foxp3 car j'ai trouvé ds la litérature des Treg générés à l'extérieur du thymus et qui n'exprime jamais le Foxp3 donc en utilisant ce triple marquage c'est comme si je ne prenais pas en concidération toute cette population là ??!!
peux tu m'éclairer sur le sujet ??
merci
D'accord je comprends mieux.
Tout d'abord au sujet des isotopes controles, je ne pense pas que tu ais besoin d'en utiliser. Ils sont vraiment utiles lorsque tu ne sais pas a quoi va ressembler ta population positive/negative.
Exemple j'en ai utilise en regardant l'expression de CD107a sur des Tcells, et cela a ete bien utile, etant donne que cela te permet de suprimer le "bruit" et de trouver tes bonnes populations etc...Mais cela n'est pas le cas avec tes CD4 et CD25 (jamais regarde Foxp3)
Sinon a part cela, il faux juste que tu "maitrise" le flow (facile a dire je
sais), mais en ayant les bons reglages de voltage, compensation et autres tu ten sortiras sans isotopes controles(surtout pour les marqueurs que tu veux utiliser).
Pour tes marqueurs, je pense qu'il serai judicieux d'ajouter un Ac anti-CD3 a ton mix pour identifier precisement tes CD4+ Tcells. Je te proposerais egalement de jeter un oeil du cote de CD5, CD45, CTLA-4 et GITR. Tu auras plus de faciliter a separer tes populations en multipliant les marqueurs. Car en utilisant CD25 et FOXP3 (qui sont toutefois les meilleurs marqueurs de Tregs), comme tu le disais tu risque de passer a cote de population interessantes.
De plus CD25 est un marqueur d'activation tardive (IL-2 recepteur) donc tu risques d'avoir des "faux positifs".
Voila. Je tiens quand meme a preciser que je ne suis pas un expert en Treg, donc ma remarque sur les marqueurs est peut-etre ininteressante ehehe.
Bonne chance
bonsoir
merci pour ta réponse je t'avoue ne pas avoir tout compris mais je v bien creuser ta réponse et plus me renseigner ! je te remercie encore une fois !
