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Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !



  1. #1
    lnk

    Talking Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !


    ------

    Bonjour tout le monde. Je voudrais simplement mettre à l'épreuve mon raisonnement.

    J'ai l'ADNc d'un gène et je récupère deux fragments :
    • Un fragment NcoI/NcoI de taille 1Kb ; après marquage des extrémités 5'P on parlera de sonde N.
    • Un fragment HindIII/HindIII de taille 0,3Kb ; après marquage des extrémités 5'P on parlera de sonde H.

    Lorsque je fais un Southern de l'ADNg :
    • ADNg digéré par HindIII + hybridation sonde H : on obtient un signal d'hybridation de 0,3Kb.
    Jusque là tout vas bien : sur notre ADNg : on a bien deux sites de restrictions adjacents HindIII qui donnent un fragment de 0,3Kb et qui hybrident avec ma sonde H.
    • ADNg digéré par NcoI + hybridation sonde N : on obtient un signal d'hybridation de 1,8Kb.
    Ça se complique un petit peu, j'émets alors l'hypothèse suivante : sur notre ADNg il y a deux sites de restrictions NcoI adjacents qui donnent un fragment de 1,8Kb. Pour expliquer les 0,8Kb, j'ai pensé à un intron situé "au centre" de mon fragment d'ADNg NcoI/NcoI.
    Arrêtez moi si il y à d'autres explications ou que la mienne ne tient pas la route.

    En fin :
    • ADNg digéré par HindIII + hybridation sonde N : on obtient deux signaux d'hybridation de 1,4Kb & 7,6Kb.
    D'après moi, cette expérience confirme mon hypothèse de présence d'un intron de 0,8Kb sur le fragment d'ADNg de 1,8Kb NcoI/NcoI. En effet, si on obtient deux bandes radioactives, c'est que notre fragment de 1,8Kb est coupé en deux par l'enzyme HindIII & la sonde N hybride avec ces deux fragments. Or notre sonde N d'ADNc de 1Kb (je rappelle NcoI/NcoI) ne possède pas de site de restriction pour HindIII donc il existe un site de restriction pour HindIII dans l'intron de 0,8Kb.

    Je vous remercie d'avance de m'avoir aidé.
    Amicalement lnk

    -----

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  3. #2
    lnk

    Re : Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !

    Personne pour me venir en aide?

  4. #3
    Yoyo

    Re : Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !

    Salut

    Pourquoi ne pas simplement penser a un polymorphisme ?

    YOyo

  5. #4
    lnk

    Re : Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !

    bonjour yoyo.

    Je présume que dans le cadre de l'étude, l'ADNc & l'ADNg sont issus d'une même culture cellulaire rénale stable ; donc même génome partout.

    C'est pour ça que j'ai pensé à un intron pour l'apparition du site de restriction.

    Amicalement lnk.

  6. #5
    piwi

    Re : Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !

    Ton hypothèse est vraissemblable mais il manque la restriction HindIII + NcoI hybridée avec ta sonde N pour confirmer.

    Cordialement,
    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    lnk

    Re : Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !

    Ok je vous remercie pour vos réponses.

    Cordialement lnk.

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