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Les mystères de la PCR



  1. #1
    Shedûn

    Question Les mystères de la PCR


    ------

    Bonjour à tous,
    J'ai une question qui va peut être paraître idiote mais bon, alons-y.
    Je m'explique. Je fais des PCR régulièrement pour génotyper des souris. Jusqu'à lundi, je n'avais aucun problème et là, boum, pas de bandes sur mon gel d'agarose. Au final, je me rend compte que je me suis bêtement trompé de concentration de dNTPs. En fait j'en ai mis trop (problème de solution mère faite un lundi trop tôt ...).Trop concentré, mais sans modification de volume final.
    Alors la question c'est : pourquoi un excès de dNTPs inhibe la réaction de PCR ? Parceque là, je ne vois pas.
    Je précise que tous les contrôles ont été faits pour être sur que c'était bien ça le souci.
    Alors si quelqu'un peut lever ce mystère...

    -----

  2. Publicité
  3. #2
    Toyeux

    Re : les mystères de la PCR

    Bonjour

    Info à vérifier mais je crois qu'un excès de dNTP chelate les ion Mg2+.

    Cordialement.

    Toyeux.

    Edit: http://www.med.univ-rennes1.fr/wkf/s...rgPCR_2008.pdf

    Regarde page 16

  4. #3
    Shedûn

    Re : les mystères de la PCR

    Et voila, ce fut un bien petit mystère....
    Merci beaucoup pour la réponse et pour le lien.
    Amicalement,
    Shedûn.

  5. #4
    Fanou63

    Re : les mystères de la PCR

    Ca m'était arrivé aussi en début de DEA. Puis on m'a demandé si j'avais bien dilué mes dNTP au 1/10...

    N'empèche que l'effet d'inhibition totale de la PCR que peut avoir une concentration trop forte en dNTP était restée mystérieuse pour moi.

    merci à vous deux pour avoir posé la question, et pour y avoir répondu !

  6. #5
    Vinc

    Re : les mystères de la PCR

    Un excès de dNTP inhibe la polymérase...

    V.
    Primum non nocere.

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    zbine2

    Re : les mystères de la PCR

    Bonjour,
    dans mon labo il ne rajoute jamais de MgCl2 et nous avons que des smears ou rien lors de nos pcr, c'est possible que sa vienne de cela? le problème c'est que sur les memes échantillons tout marché super bien avant !

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  10. #7
    Toyeux

    Re : Les mystères de la PCR

    Bonjour.

    Ton ADN polymerase a besoin de MgCl2 pour fonctionner correctement donc effectivement cela peut venir de ça.

    Néanmoins, de nos jours, je crois que tous les tampons PCR présent dans les kits en contiennent un minimum.
    (Perso j'achète chez qiag*n ou stratage*e et j'ai mon tampon PCR + un tube de MgCl2 au cas ou je voudrai en rajouter.)

    Après si vous achetez pas de kit, peut être que.....

    Cordialement.

    Toyeux.

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