Utilisation du bain marie dans le dosage des enzymes

[invitee7b29f0a]

Dans un protocole de dosage d’une enzyme
On me dit que la première étape c’est préparer l’homogénat (broyer le tissu dans un tampon sur la glace puis le centrefuger puis le conserver sur de la glace). Pour le froid on m’a dit c’est pour inhiber le travail des enzymes).
Ensuite je dois préparer le deuxième tampon, celui de la réaction, et le produit que l'enzyme est sensé à dégrader.
Et la je ne comprends pas. Il y a une phrase qui dit « place buffer in water bath at 26C°», placer le tampon dans le bain marie à 26C°.
Est-ce que je dois placer juste le tampon au bain mari ou je dois placer la dedans aussi la substance que j'ai préparé et qui doit réagire avec l'enzyme.
Je suppose que l’utilisation du bain mari c’est pour donner une température adéquate à la réaction lors de sa provocation dans la cuve du spectrophotomètre. Mais là je pense ceci : le tampon et la substance distinée à régire avec l'enzyme sont conservés à une température de 26C°, Ok ? MAIS l’homogénat et sur la glace 4C° et au moment du mélange dans la cuve 4C° et 26C° je ne sais pas ce que ça va donner !
Je vous en prie de me corriger.
Merci beaucoup
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[invitee863e61a]

Dans un protocole de dosage d’une enzyme
On me dit que la première étape c’est préparer l’homogénat (broyer le tissu dans un tampon sur la glace puis le centrefuger puis le conserver sur de la glace). Pour le froid on m’a dit c’est pour inhiber le travail des enzymes).
Ensuite je dois préparer le deuxième tampon, celui de la réaction, et le produit que l'enzyme est sensé à dégrader.
Et la je ne comprends pas. Il y a une phrase qui dit « place buffer in water bath at 26C°», placer le tampon dans le bain marie à 26C°.
Est-ce que je dois placer juste le tampon au bain mari ou je dois placer la dedans aussi la substance que j'ai préparé et qui doit réagire avec l'enzyme.
Je suppose que l’utilisation du bain mari c’est pour donner une température adéquate à la réaction lors de sa provocation dans la cuve du spectrophotomètre. Mais là je pense ceci : le tampon et la substance distinée à régire avec l'enzyme sont conservés à une température de 26C°, Ok ? MAIS l’homogénat et sur la glace 4C° et au moment du mélange dans la cuve 4C° et 26C° je ne sais pas ce que ça va donner !
Je vous en prie de me corriger.
Merci beaucoup

Très bien vu mais il est probable que le volume de votre échantillon (homogénat) soit très inférieure à celui du tampon (et de la cuve, qui est à température ambiante!)si bien que l'échange thermique entre les deux va égaliser les températures des deux autour de 26°C. De plus, votre réaction enzymatique va durer plusieurs minutes alors que les échanges thermiques se feront beaucoup plus vite dans ces conditions et seront terminés au moment où vous ferez vos observations sur l'activité de l'enzyme (le calcul de la vitesse de réaction ne se fait pas au tout début de la réaction)
Bon courage

[invite935d76c1]

petite precision , ce n'est pas le travail de toutes les enzymes que l'on inhibe par le froid mais surtout les protéases qui détruiraient ton enzyme ^^

et je confirme le rep precedente ( super claire en plus ^^)