Bonjour,
Pour sortir des sentiers battus, j'ai décidé de tester une autre méthode d'extraction d'ADN pour le génotypage par PCR de mes souris, dont j'ai récemment entendu parlé.
Le protocole Hot SHOT est assez simple : digestion des tissus dans de l'hydroxide de sodium 50mM à 95°C pendant 1 heure, puis +4°C, et neutralisation au Tris pH 8. Centrifuger rapidement et utiliser quelques microlitres de surnageant directement pour la PCR.
Classiquement ce protocole est utilisé pour les queues de souris, dans mon cas je l'utilise pour des biopsies d'oreilles (ca fait moins mal !, surtout sur des souris agées).
Mon problème est qu'après 2H de "digestion" par la soude chaude, mon tissu ne se désagrège pas au pipettage... Il est devenu blanc et presque transparent.
Est ce que quelqu'un a déjà utilisé cette approche ?
La soude va permettre la digestion des protéines, la saponification des lipides?, ce qui peut expliquer le changement de coloration de mon tissu (pigmentation noire de la peau => blanc), mais est ce suffisant pour permettre la libération de l'ADN génomique ?
Merci pour vos avis !
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