bonjour à tous,
je cherche à connaitre les différents solvants dans lesquels les phospho et les glycolipides sont solubles ou insolubles???
Ou bien savoir comment est il possible de les extraire de la matière végétale.
Merci d'avance
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bonjour à tous,
je cherche à connaitre les différents solvants dans lesquels les phospho et les glycolipides sont solubles ou insolubles???
Ou bien savoir comment est il possible de les extraire de la matière végétale.
Merci d'avance
Alors, classiquement, les phospholipides sont extraits dans un mélange chloroforme/méthanol (2/1).
En gros:
1. Broyage des cellules ou tissu (25-150 mg) dans un Potter avec 1,5 ml de saline (0,9% NaCl). Homogénéiser
2. Verser le premier 1,5 ml dans un tube en verre (pas de plastique, les lipides y adhèrent) et rebroyer dans le Potter avec un autre 1,5 ml de saline.
3. Pooler les 3 ml ensemble. Rincer le Potter avec 4 ml de chloroforme que tu mélanges avec les 3 ml de fraction aqueuse. Bien mélanger.
4. Ajouter 2 ml de méthanol. Bien mélanger.
5. Rajouter 4 ml de chloroforme et 2 ml de méthanol et bien mélanger.
6. Centrifuger 15 minutes, 500 g. Récupérer la phase organique. Réextraction sur la phase aqueuse des lipides "restant" avec une solution Chloroforme/méthanol/NaCl (86/14/1, v/v/v).
7. Centrifugation 15 minutes, 500g. Pooler les 2 phases organiques. Sécher sous flux d'azote et reprendre dans un volume minimal de chloroforme/méthanol (75/25).
En reprenant plusieurs fois dans des volumes chaque fois plus petits et en transférant des tubes en verre plus petits, on peut concentrer considérablement l'échantillon.
Cet échantillon comprend à peu près tous les phospholipides et une bonne partie des glycolipides. Prudence concernant les glycolipides, donc : si certains sont très chargés (grâce à des sucres très hydrophiles), il risque d'y avoir une perte de rendement. Chez les animaux, ce problème survient avec les gangliosides (lipides portant un acide sialique, carrément chargé négativement) : ils s'extraient dans la phase aqueuse. Chez les plantes, tu n'auras pas ce problème (n'en déplaise à une équipe américaine, je ne crois pas une seconde que les plantes aient des acides sialiques).
Attention, ce protocole marche très bien pour les tissus animaux, mais je ne l'ai jamais testé sur du tissu végétal. Ceci dit, contrairement à une extraction protéique, tu ne devrais pas te retrouver avec la paroi sur les bras, puisque ce qui t'intéresse est la phase organique.
Ah oui, la référence du protocole (vu que je l'ai pas inventé) :
Shaikh NA et Downar E, "Time course of changes in porcine myocardial phospholipid levels during ischemia". Circ. Res. (1981)