pcr/clonage

[invite58af60a0]

Bonjour,

Je ne comprends pas trop ou a lieu l'étape de la PCR dans le clonage et quel est son rôle?
Est ce qu'on fait la PCR apres avoir inseré les fragments d'intérets dans les vecteurs,ou est ce qu'on amplifie par PCR les fragments d'intérets qu'on insere ensuite dans le vecteur?Pour moi la PCR est une technique de clonage,donc si on connait la séquence qu'on veut cloner,une PCR est suffisante,il n'y a pas besoin d'utiliser de vecteurs apres?
C'est pas très clair dans mon cours ni dans ma tête je m'excuse d'avance si je dis des choses abbérantes.Merci d'avance!
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[invite71f23525]

Bonjour,

La PCR va permettre d'isoler et amplifier un fragment d'intérêt qui va ensuite être intégré dans un vecteur. Lorsqu'on fait un clonage ou un sous-clonage, on souhaite exprimer ce fragment qui dans la plupart des cas correspond à l'ADNc codant une protéine ou une partie de la protéine. Il faut donc un promoteur en amont du fragment pour qu'il soit transcrit, il faut des séquences d'initiation de la transcription pour l'expression chez une bactérie, une séquence ori qui permet la réplication du vecteur et de son insert. Tout ceci se trouve dans un vecteur et est indispensable à l'utilisation du fragment isolé. D'où la nécessite de s'embêter à insérer le fragment dans un vecteur.

Greg