Bonjours, voici mes différentes question:
1) Quelles est la différence entre une souche E.Coli JM109 et DH5alpha pour la production de protéine recombinante.
2) Dans l’obtention d’ADN plasmidique dans un kit (Ex : MINIPREP) pourquoi l’ADN chromosomique est t’il dénaturé par la solution de lyse (NaOH/SDS) et pas l’ADN plasmidique ?
Merci d'avance pour toute les réponses éventuelles.
Dernière modification par LXR ; 14/06/2009 à 16h51. Motif: titre explicite
Re : Souches d'expression et préparation de plasmides
1* Génotype:
E. coli JM109 : F`traD36 lacIq Δ(lacZ)M15 pro A+ B+ / e14- (McrA - ) Δ(lac-proAB)thi gyrA96 (NaIr)endA1 hsdR17(rk- mk+ )reIA1 supE44 recA1
E. coli DH5 α :F-, φ 80dlacZ ﾆM15, ﾆ(lacZYA-argF)U169, deoR, recA1, endA1, hsdR17(rk-, mk+), phoA, supE44, λ -, thi-1, gyrA96, relA1
>>> F' chez E. coli JM109 va servir pour la préparation d'ADN simple brin dans le cas des constructions de banque... ou bien pour le sous clonage
2* L'extraction d'ADN plasmidique consiste à effectuer la lyse des cellules au moyen d'un détergent (dodécyl sulfate de sodium) en présence de soude, à pH 13. A ce pH très alcalin, l'ADN est dénaturé, c’est-à-dire que les deux brins de la double-hélice sont séparés. On neutralise ensuite rapidement la solution, ce qui provoque la rénaturation brutale (réappariement des brins du duplex d'ADN). L'ADN chromosomique, très long (~10⁶ pb), ne parvient pas à se réapparier complètement et forme des enchevètrements insolubles. L'ADN plasmidique, court (~10³ pb), parvient à se reformer et reste en solution. On sépare alors les espèces par centrifugation. Les protéines précipitées, sont également éliminées avec le détergent et l'ADN chromosomique.
