(biochimie) point isoélectrique.

[invite94934d63]

Bonjour, j'ai gros doute sur une question de QCM... Et j'aimerais avoir votre avis.

Question: la fraction la plus riche en protéine P est dialysée contre un tampon phosphate 20mM pH 7, NaCl 50 mM, puis chromatographiée sur une résine échangeuse d'anions. Diverses protéines dont la protéines P, jusqu'alors retenues par la résine, sont éluées par la diminution du pH jusqu'à 6.

A: Sa charge (celle de P) est nulle pour un pH compris entre 6 & 7
B:Son Pi est supérieur à pH 7
C:son Pi est égal à 6
D:son P est compris entre 6 et 7
E:son Pi est inférieur à 6

J'avais répondu A & D. Mais j'ai un gros doute. Mon premier raisonnement constitué à dire qu'a pH 7, P est positif, qu'au cours de la diminution, elle se libère des billes, et que donc entre 6&7 sa charge devenait négatif et que donc son Pi était compris entre 6 & 7.

Cependant, j'viens de me souvenir qu'un de nos profs de TD, nous avait appris que:

pH min___________________pH max
................+.......Pi.... .....-................

Dans ce cas P est positif à 7 et il le reste à 6.... et que donc, ca serait la réponse B...

Donc voilà ... je ne sais quelle réponse choisir...

et question subsidiaire : si on coupe les ponts disulfures par béta mercaptoéthanol, et qu'on trouve trois peptides, peut on les appeler trois sous unités ?
Et à l'inverse si on utilise rien d'autre que du détergent, genre du SDS, et qu'on trouve deux peptides, peut-on les appeler sous unité..

En claire, qu'appelle t on des sous unités ? (est ce un peptide non réductibles par des réducteurs ? )

Merci d'avance .
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[invite94934d63]

erf désolé pour le doublon..
Mais en me relisant je vois que sur ma dernière question je ne suis pas très clair...

Je voudrais savoir si à l'issue d'une SDS page (électrophorèse monodimensionnelle ) : si il y a deux bandes sans réducteur et une bande avec reducteur..

Dont on conclure qu'il y a au moins trois sous unités ? Ou bien deux ?

[invite94934d63]

trouvé où était mon défaut

Echangeuse d'anion= résine positive...
Donc P a pH 7 est négatif.. donc, entre 7&6 devient positif, est libérée... et donc son Pi est compris entre 7 et 6 ...

A B vrai! (bon c'est là qu'une double erreur, permet quand même d'avoir bon xD..)

Par contre, toujours pas trouvé de réponse à ma deuxieme question ..

Salutation !

[Zellus]

Bonsoir,

A B vrai!

A et D tu voulais dire je suppose ?

et question subsidiaire : si on coupe les ponts disulfures par béta mercaptoéthanol, et qu'on trouve trois peptides, peut on les appeler trois sous unités ?
Et à l'inverse si on utilise rien d'autre que du détergent, genre du SDS, et qu'on trouve deux peptides, peut-on les appeler sous unité..

En claire, qu'appelle t on des sous unités ? (est ce un peptide non réductibles par des réducteurs ? )

C'est vrai que la définition n'est pas toujours très claire ...
Une sous-unité (SU) est une protéine (une chaîne polypeptidique issue d'un gène unique) qui va s'associer à une ou plusieurs autre(s) SU pour former une protéine oligomérique fonctionnelle (elle est donc indispensable pour que le complexe protéique soit parfaitement opérationnel). A noter que dans le cas du ribosome on parle aussi de (petite et grande) SU, mais là ce ne sont pas des protéines uniques mais des complexes ribonucléoprotéiques.

La plupart du temps, les SU (qu'on appelle aussi monomères, ou protomères quand ils sont dans l'oligomère), interagissent entre elles via des interactions faibles (hydrophobes, ioniques ...). Donc même en absence de β-mercaptoéthanol (βME), si tu as deux bandes, il y a des chances pour que tu n'aies que deux SU dans ta protéine qui serait alors un hétérodimère.

Mais attention car il y a quand même plusieurs pièges :

• Tu peux avoir des SU (ça peut être des protéines différentes ou la même protéine) qui migrent à la même taille sur le gel, et tu risques de sous-estimer le nombre de SU.
• Il peut arriver que les SU soient reliées par des liaisons covalentes (ponts disulfures) et donc dissociables uniquement avec un réducteur. C'est le cas par exemple des immunoglobulines qui sont des hétérotétramères. Leurs SU sont souvent appelées chaînes lourdes et légères mais ça reste quatre chaînes polypeptidiques différentes issues de deux gènes (un pour les chaînes lourdes et l'autre pour les chaînes légères).
• Il existe également des protéines comme l'insuline (je n'en n'ai pas d'autres à l'esprit là ) qui est issue d'un seul gène mais qui après maturation est formée de deux chaînes reliées par des ponts disulfures. Dans ce cas je ne considère pas qu'il s'agit de deux SU vu qu'elles proviennent de la même proprotéine.

Je voudrais savoir si à l'issue d'une SDS page (électrophorèse monodimensionnelle ) : si il y a deux bandes sans réducteur et une bande avec reducteur..

Dont on conclure qu'il y a au moins trois sous unités ? Ou bien deux ?

Tu auras toujours plus (ou autant) de bandes en présence de βME sur un SDS-PAGE, vu que le SDS est présent dans les gels avec ou sans réducteur. Donc ton exemple n'est pas possible.

Voilà j'espère avoir été clair. Bonne nuit !

[A voir en vidéo sur Futura]