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Fluorescence en tissus fixés



  1. #1
    Flyingbike

    Fluorescence en tissus fixés

    Bonjour à tous,

    J'utilise un vecteur adénoviral pour exprimer une protéine dans le foie de souriceaux. Ce vecteur permet aussi l'expression de la GFP. Comme je fais des coupes pour l'histo, je me demandais si je ne pouvais pas en profiter pour vérifier la topographie de l'infection en regardant la fluorescence de la GFP.

    Question : la gfp reste-t-elle fonctionnelle apres fixation des coupes (PFA 4%) ? Sur la dernière série je n'ai rien vu mais les tissus avaient quand même souffert.

    Merci

    -----


  2. #2
    fabien.che

    Re : Fluorescence en tissus fixés

    Bonjour,

    Tout ce que je peux te dire c'est qu'il n'y a pas de raisons pour que la fluorescence disparaisse avec la fixation en PFA 4%.

  3. #3
    Nicolas.Ca

    Re : Fluorescence en tissus fixés

    Honnêtement, je n´ai aucune expérience avec des tissus exprimant une protéine marqué par GFAP.

    Par contre ma voisine de bureau a déjà réalisé ces expériences. Voici le protocole qu´elle a utilisée:

    1/ perfusion des souriceaux avec PFA 4%.
    2/ post-fixation (10x plus de solution que de tissus) avec 4% pendant 2 jours et PFA 0,4% sur 5 jours.
    3/Tissus montés dans de la paraffine et coupé au micotome.
    4/Pas de marquage complémentaire comme control positif, lamelles juste déparaffinéisées et montées dans du moviol.

    Concernant ton problème, est tu sur que la protéine est exprimée (Western-Blot ou Immuno HistoChimie classique).
    Que cet animal est positif pour la mutation?
    Tu dis que tes tissus sont endommagés. Tu devrais te demander si ces dommages ne sont pas la source de ton manque de signal.
    Est ce un problème lors des sections? Lors de la perfusion? lors de la déparaffinassions?

    Tiens moi au courant ^^

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