Bonjour à tous.
Dans le cadre de mon projet tuteuré de 2è année de DUT Génie Biologique, je recherche des avis concernant la technique la plus appropriée pour mesurer/détecter l'apoptose de lignées cellulaires sous l'effet de la toxine émétique de Bacillus cereus, sachant que le budget maximal est de 150 euros...
Si vous avez de l'expérience dans ce domaine, votre aide serait la bienvenue!
Merci d'avance.
Bonjour
Vous pouvez faire une cytofluorométrie en flux en marquant la phosphatidyle sérine, et l'annexin 5 de cellules. Les doubles positifs seront en apoptose.
ca rentrera pas dans le budget !
Ce qui n'est pas cher, mais je sais pas si c'est correct pour ce cas, c'est la méthode de la comète.
Bonjour,
La cytométrie de flux pour 150€, ça me parait un peu juste
J'aurais plutôt pensé un peu plus simple:
Culture de tes lignées.
Sensibilisation avec ta toxine
Coloration au bleu trypan (ici pour les détails) et comptage des cellules mortes(en sachant que le bleu trypan ne permet pas de distinguer apoptose et nécrose)
Du coup ça devrait rentrer dans ton budget
Le bleu Trypan est une bonne idée mais il s'agit de la mort cellulaire générale malheureusement.
Un truc pas cher et qui permet d'observer une caractéristique marquée de l'apoptose, c'est un marquage de cellules fixées sur une lamelle avec du DAPI et visualisation au microscope. Les cellules dont le noyau est condensé et/ou fragmenté sont en apoptose.
Un TUNEL ca ne fait pas l'affaire? C'est quand même la technique utilisée le plus fréquemment pour caractériser l'apoptose. En revanche il y a un peu de réaction croisée avec les stades avancés de nécrose. Mais grosso modo ça marche bien.
Cordialement,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
oui mais un kit tunel ça coute plus de 150 euros quand même, non ?
Oui. J'avais pas fais très attention à cette condition. Les prix d'un kit sont plus de l'ordre de 600$.
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
faudrait deja savoir quel matériel vous avez. Pour le dapi il faut de la fluo; mais pas pour le trypan par exemple.
Tu peux très bien utiliser le Bleu Trypan en indiquant ensuite dans ta discussion le biais ainsi ajouté par cette technique en expliquant le coût supplémentaire qu'aurait nécessité l'utilisation d'une méthode plus sélective. C'est un petit jeu auquel on joue souvent dans les labos
Sinon le DAPI comme disait LXR. Je sais plus combien ça coûte ce truc. Après, ça peut aussi dépendre de ton labo. Selon les quantités commandées, les fournisseurs sont parfois très très généreux.
Bonsoir et merci à tout le monde pour vos réponses!
On a bien sur pensé à la cytométrie de flux, mais oui c'est totalement infaisable avec ce budget de 150euros...
Sinon après quelques recherches, effectivement le DAPI et la méthode TUNEL me paraissent intéressantes et surtout abordables, mais je vais chercher les prix.
Et en effet kamor, en dernier recours je pense que si on utilise le bleu trypan (3euros pour 7.5ml) en précisant les problèmes de budget ca passera, même si ce sera forcément un peu moins précis en comptant les nécrosées...
Sachant tout de même que dans les 150euros, on entend le prix du réactif, le prix pour la culture cellulaire et éventuellement le prix de la culture de B. cereus.
