PCR en temps réel, (chimie Taqman)

[invite934524b8]

Bonjour,
la question est comment calculer l'efficacité de la PCR en temps réel, (chimie Taqman) j'ai trouvé plusieurs formules mais je ne sait pas quelle est
moi j'utilise la Q PCR pour la détermination de niveau de la méthylation de l'ADN pour un gène donnée,
et pour déterminer l'efficacité des amorces je fait une gamme des dilutions au 1/25eme,donc est ce que ce juste de trouver une différence de Ct entre 4 et 5 cycles entre chaque 2 points (1/25 et 1/625 par exemple) ou svp comment faire

Merci d'avance
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[Guillaume69]

Salut,

A chaque cycle, la quantité de produit est doublée si l'efficacité est de 100%.

1/625 est 25 fois plus dilué que 1/25.
2^4 = 16
2^5=32

Donc oui, 4 à 5 cycle de plus, ça me paraît ok.

Sinon, pour déterminer l'efficacité de manière exacte, voilà ce que je ferais :

Supposons que tu aies une différence de p cycles entre tes deux conditions.





Donc finalement .
Ca te fait une efficacité comprise entre 90% (p = 4) et 1,23 (p=5). Donc c'est cohérent.

[invite934524b8]

Merci c'est trés gentille,

mais pour moi j'utilise une gamme de dilution au 1/25eme: -1- -1/25 - -1/625- -1/5625- et 1/39625 mais le problème je n'obtient rien (cad pas de Cp) pour les dilutions -1/5625- et 1/39625 qui peut etre due à la quantité d'ADN, trés faible, donc pour tester l'efficacité de mes Primers est ce que je peut faire une autre gamme de dilution (plus faible) est d'après vous laquelle (dilution au 1/4eme ou laquelle...?) que ce que tu pense?,
Merci.

[Guillaume69]

Hello,

Désolé mais je n'en ai aucune idée ^^
Je n'ai jamais mis au point de rtqPCR à vrai dire...

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite934524b8]

Merci pour votre aide