Etudier l'expression d'une protéine entre différentes cellules.

[invite0df1937b]

Bonjour.

Je m’intéresse à l'hétérogénéité cellulaire entre cellules d'une même culture.
J'aimerai savoir si quelqu'un aurai un conseil quand à une technique permettant d'approcher au niveau d'une seule cellule l'expression d'une protéine, afin de pouvoir comparer par exemple, des cellules en périphérie de la culture (plus grosses, densité plus faible) à des cellules centrales (petites et denses).
De plus, quelqu'un sait-il comment on peut appréhender la sécrétion et mise en place d'une matrice extracellulaire par notre culture cellulaire?

Merci d'avance!

Galimor
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[invitef31aae78]

slt!
pour suivre l'expression de la protéine tu peux faire un extraction purification de la proteine dans les deux cellules séparément puis tu fait un blotting ( westerne blot pour suivre le niveau d'expression de la protéine c'est-à-dire la quantité de la protéine dans les deux cellules). pour cela tu mets les cellules en culture puis à un certain temps tu prélève les cellules et tu fait l'extraction de la protéine et purification. lorsque tu fait le westerne blot tu révélera avec des anti-corps diriger contre la protéine d'intérer. sinon tu peux faire aussi un marquage de la protéine avec des acides aminées radioactive en utilisant la technique de pulse chasse. ou sinon tu peux la marquer avec une protéine raportrice comme la gpg,...

[invite0df1937b]

Merci de ta réponse, mais le Western blot ne permet pas (ou alors je ne voit pas comment) d'étudier l'expression dans UNE cellule.
Or je cherche vraiment à avoir une information pour CHAQUE cellule séparément.

[Flyingbike]

Merci de ta réponse, mais le Western blot ne permet pas (ou alors je ne voit pas comment) d'étudier l'expression dans UNE cellule.
Or je cherche vraiment à avoir une information pour CHAQUE cellule séparément.

Ben il y'a toujours le FACS mais qui n'est pas très quantitatif, comme l'immunofluorescence.
Ce qui est possible c'est la single cell PCR, mais tu étudies les ARNm dans ce cas.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite0df1937b]

...single cell PCR...

Tu peux m'en dire un peu plus stp? quel est le principe, par rapport à une PCR classique?

[Flyingbike]

Eh bien le principe c'est que tu amplifies tes gènes d'intérêt à partir de l'ARN issu d'une seule cellule. Tu sais donc ce qui se passe dans une cellule et pas dans un homogénat de plusieurs cellules.

[invite0df1937b]

merci, je vais essayer d'en savoir plus.