Immunofluorescence marquage

[invite5807876b]

Bonjour,

N'étant pas biologiste de base, j'essaie de faire des marquages cellulaires pour faire ensuite des observations en microscopie confocale.
J'ai besoin d'un marquage du noyau + de l'ensemble de la cellule dans le rouge et le bleu.
Pour le noyau j'utilise du Hoescht (pardon pour l'orthographe) qui émet donc dans le bleu. Ce marquage est parfait.
Je cherche donc maintenant à marquer le cytoplasme (si c'est noyau + cytoplasme c'est bien aussi) avec un marquage rouge. J'ai essayé l'iodure de propidium mais le marquage n'est pas très homogène et ne me convient pas.
Connaitriez vous un marquage cellulaire solide pour l'ensemble de la cellule dans le rouge? Si non, on peut intervertir rouge pour noyau et bleu pour cytoplasme...

2eme petite question : J'entend parler de marqueur vital CFSE. Dans quelle couleur cela émet-il? Je vois toujours des applications en cytométrie, est-ce aussi utilisable en imagerie? Auriez vous des exemples d'images à montrer? Existe-il un même type de marqueur qui émette dans le rouge?

D'avance merci pour votre aide.
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[inviteb3a6feac]

Bonjour

Vous pouvez coupler votre anticorps, ou votre marqueur à la fluo que vous désirez.

Regardez ici pour avoir des précisions sur le CFSE, qui émet dans le vert.

Mais pour plus de précision, que désirez vous montrer dans votre marquage cellule totale en confocal ? Vous pourriez utiliser un marqueur du cytosquelette non ?

Cordialement
Nowell

[Flyingbike]

je pensais aussi à ça. Actine puis anticorps texas red ou alexa 595. Mais c'est peut être plus cher qu'un marquage simple comme le DAPI. Quel est le but ?

[invite5807876b]

Le but est d'avoir un marquage de la cellule et du noyau le plus homogène possible. je m'en sers ensuite pour modéliser ma cellule dans un code de calcul. Je m'intéresse donc juste à la géométrie de la cellule.
J'utilise déjà du vert pour un troisième marquage d'Ac membranaires qui est très bien actuellement et donc j'aimerais ne pas avoir à le changer.
J'ai peur que le marquage du cytosquellette ne soit pas "homogène". je me trompe peut être...

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite5807876b]

Pour faire simple je voudrais avoir le même type de marquage du noyau avec le hoesht ou DAPI (au niveau de l'homogénéité du marquage) mais dans le cytoplasme...

[Flyingbike]

effectivement c'est par définition pas homogène. Mais dans une cellule selon l'échelle à laquelle on se place, rien n'est homogène.

[invite5807876b]

quand je vois les images avec de l'actine ce n'est pas assez homogène pour moi
Je travaille au grossissement 64x...

[invite5807876b]

je viens de voir qu'il y avait aussi la DNase I conjuguée au Texas Red qui pourrait faire ça.
Connaissez vous ceci?
merci

[invite1f0474b9]

Le plus simple c´est le mettre dans google, de rechercher les images correspondantes et si possible qui proviennent d´article. N´oublie pas de vérifier la légende de l´article au cas où...