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Ligation



  1. #1
    hameg

    Ligation


    ------

    Bonjour,

    J'ai un petit exercice à résoudre mais je ne n'arrive pas à interpréter les résultats.

    Deux fragments d'ADN (provenant d'ADN plasmidiques différents) sont purifiés puis digérés par Bam HI. Le premier fragment fait 200 bp et le second 700 bp. On veut fusionner ces deux fragments en présence d'ADN ligase.
    Au bout de 30 min de ligation, on obtient 7 fragments de 1 à 2 kb et au bout de 8 heures 4 fragments de 1,8 à 2 kb (l'intensité des autres ayant beaucoup diminué).
    Si on recoupe l'ADN du mélange de ligation par Bam HI on retrouve les 2 fragments de départ.

    Je ne comprends pas pourquoi on n'a pas 1 fragment de 900 bp sur le gel pendant la ligation. Est ce possible qu'une ligase ait une activité d'endonucléase ou qu'il y ait un réactif du mélange de ligation qui hydrolyse l'ADN ?

    Merci d'avance pour votre aide

    -----

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  3. #2
    malesore

    Re : Ligation

    Tu ne peux pas imaginer retrouver sur ton gel le plasmide non digéré et le plasmide digéré ? ce qui expliquerait les grandes bandes !

    De plus, est-il possible que les fragments se lient plusieurs fois les uns à la suite des autres ?
    Seul l'étang calme reflète les étoiles

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