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Electrophorèse en gel d'agarose pGFP



  1. #1
    aele080293

    Electrophorèse en gel d'agarose pGFP


    ------

    Bonjour,

    J'ai réalisé une manip en TP dont les résultats me semblent un peu étranges...
    J'ai réalisé sur un plasmide pGFP une extraction classique puis un traitement à la Rnase et parallèlement une digestion avec BamHI.
    Je m'attendais à avoir sur la première piste plusieurs fragments correspondant au plasmide non digéré, donc sous différentes formes,
    puis sur la deuxième piste avec la digestion des ARN contaminants et un seul fragment, correspondant à de l'ADN sous forme linéaire, puisqu'il n'y a
    qu'un seul site de restriction.
    Pour la piste après le marqueur de taille, c'est l'extraction avec kit, (+Rnase) je m'attendais à avoir plusieurs fragments d'une intensité supérieure à la méthode classique.
    Jusque là, tout est logique.
    Seulement, l'ADN digéré est linéaire, il devrait migrer plus loin que l'ADN plasmidique non digéré. Et d'après le gel (que je vous met à disposition), l'ADN linéaire migre moins loin que l'ADN plasmidique. Là, je n'y comprends plus rien.
    Ai-je eu une erreur de raisonnement?

    Merci pour vos réponses !

    gel.jpg

    -----

  2. #2
    Flyingbike

    Re : Electrophorèse en gel d'agarose pGFP

    peux tu nous expliquer clairement ce qu'il y a dans les puits ?

  3. #3
    aele080293

    Re : Electrophorèse en gel d'agarose pGFP

    Excusez mon manque de clarté...^^'

    Puit 1 : pGFP traité à la RNase(0,05mg/mL) après extraction en méthode classique (TP de pré-lyse, de lyse, de neutralisation et purif) et repris dans du TE
    Puit 2 : pGFP digéré 1h par BamHI à 37°C puis réaction arrêtée à 65°C pdt 10 min
    Puit 3 : Marqueur de taille 1 kB de Fermentas
    Puit 4: pGFP extrait par miniprép (GeneJET Plasmid Miniprep Kit)
    Et après ce sont les résultats de mon binôme, traitement identique aux deux premiers puits.

    Ai-je assez détaillé ? :S

  4. #4
    Flyingbike

    Re : Electrophorèse en gel d'agarose pGFP

    ça peut arriver si le plasmide circulaire est superenroulé. Dans ce cas, il a une taille apparente inférieure au plasmide linéaire.
    Par contre dans ce cas on devrait voir aussi des formes intermédiaires.
    Attends d'autres avis

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