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PB ADN dans le puit d'agarose



  1. #1
    cortex2011

    PB ADN dans le puit d'agarose


    ------

    Bonjour à tous,

    Je viens de commencer un nouvel emploi en labo, dans lequel la thématique est basée sur des techniques de clonage que je n'ai jamais fait auparavant.
    Je commence mon 1 er clonage, donc pour faire court j'ai coupé mon vecteur avec une enzyme de restriction ApaI, qui devrait le linéariser.
    Après digestion, j'ai fais migrer mon plasmide coupé versus le non coupé et j’obtiens bien les 3 formes du plasmide non coupé, mais par contre mon plasmide coupé avec ApaI est resté dans le puit, j'ai refais la digestion est même chose.
    J’ai testé l'enzyme ApaI sur un autre vecteur et elle coupe super bien.

    Alors quoi faire, je ne pense pas que ce soit la quantité d'ADN car j'ai refais le même protocole avec un autre vecteur et cela fonctionne.

    Aidez moi!!!!

    -----

  2. #2
    Flyingbike

    Re : PB ADN dans le puit d'agarose

    une petite photo ?

  3. #3
    cortex2011

    Re : PB ADN dans le puit d'agarose

    Bonjour,

    Voila la photo du gel, mon problème est au niveau du dernier puit.

    1. marqueur
    2. plasmide 1 non coupé
    3. plasmide 1 coupé par BglII (1 site)
    4. plasmide 1 coupé par ApaI (1 site)
    5. marqueur
    6. plasmide 2 non coupé
    3. plasmide 2 coupé par BamHI (2 sites)
    4. plasmide 2 coupé par ApaI PB dans le puit. (1 site)

    Taille plasmide 1 non coupé: 9131bp
    Taille plasmide 2 non coupé.17 814bp

    Merci pour votre aide,

    Cortex2011
    Images attachées Images attachées

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