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Calcul d'activité enzymatique



  1. #1
    hana19

    Calcul d'activité enzymatique


    ------

    Bonjour,
    J'ai un exercice à faire et il y a une question que je n'arrive pas à résoudre.
    Nous devons, mesurer l'activité enzymatique d'une enzyme (la trypsine) à differente température allant de 30 a 60°.
    Nous avons fait réagir la trypsine avec un substrat le z-arg-pna et le produit formée est mesurée par absorbance.
    Il y a plusieurs courbes .

    Ce que je ne comprend pas c'est pourquoi l'absorbance est mesuré a 1.859
    est-ce la variation d'absorbance?
    pour moi l'activité enzymatique correspond à la pente de la courbe et donc est exprimé en A.min
    pour cette courbe de température 4° je trouve 0,88A.min
    Mais on nous précise dans l'énoncé que la concentration du produit est de96µM et que son absorbance est de 0,843.
    Je ne sais pas comment me servir de ces données

    Je voudrais une petite piste
    merci

    -----

  2. #2
    hana19

    Re : A partir d'une courbe Calculer l'activité enzymatique

    bonjour

    Je voudrais une piste pour savoir comment est-ce qu'on passe des Aborbances.min à des
    µmol.L de substrat.min pour trouver l'activité enzymatique

    Nom : courbe enzymo2.JPG
Affichages : 816
Taille : 39,7 Ko

    La valeur entourée en rouge je ne sais pas a quoi cela correspond
    Je voudrais une piste merci
    merci
    Dernière modification par hana19 ; 04/12/2011 à 10h39.

  3. #3
    LXR

    Re : A partir d'une courbe Calculer l'activité enzymatique

    Loi de Beer-Lambert : A = e.l.C où A est l'absorbance, e est le coefficient d'extinction molaire, l est la longueur que traverse le laser qui correspond à la largeur de la cuve de spectro qui est d'un cm, et c est la concentration molaire.
    A partir de cette relation, tu peux donc obtenir des concentrations à partir d'absorbances et vice versa en connaissant la valeur du coefficient d'extinction molaire. Toi tu veux obtenir une concentration à partir d'une absorbance connue, donc tu poses : C = A/e.l, vu que l est égal à 1, cela donne : C = A/e.
    On ne te donne pas directement le coefficient d'extinction molaire mais une correspondance entre la concentration du substrat que tu regardes et son absorbance à cette concentration. Vu ce que je viens de t'expliquer, tu dois être maintenant capable de calculer en premier le coefficient d'extinction molaire du substrat, et ensuite de convertir tes Abs.min en µmol.L.min.

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