Isolation d'ARN et élimination de DNase

[emma59]

Bonjour,

Je dois extraire de l'ARN de souris sur différents organes. Pour des raisons de budget , j'utiliserai le TRizol et non des colonnes. Je compte déposer mes ARN sur gel pour vérifier la qualité et voir si ils ne sont pas contaminés par de l'ADNg et dans ces cas faire agir de la DNase de chez Qiagen (celle utilisée avec les colonnes RNeasy par exemple) car il m'en reste pas mal. Par contre, vu que je n'ai plus de colonnes , je ne pourrai pas faire un clean-up. Dois-je laisser la DNase ou puis m'en débarrasser autrement comme par la précipitation de l'arn avec de l"éthanol et de l’acétate de sodium. Sachant enfin que je perds en rendement à chaque précipitation et que certains de mes organes sont très petits.
Je vous remercie pour vos conseils et expériences.

Emma
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[Flyingbike]

oui il faut s'en débarrasser. la DNase s'inactive 15min a 75°, mais ce n'est peut être pas l'idéal. Précipiter a l'isopropanol ça peut le faire, mais effectivement il y aura des pertes. Mon expérience : j'utilisais du RNAplus, ça ressemble au trizol, et je n'ai jamais eu de problèmes d'ADN.

C'est pour faire de la PCRq ?

[Angmar]

Sinon il y a le kit TURBO DNA free d'Ambion, très simple d'utilisation, et où l'enzyme s'inactive avec des microbilles (fournies avec).
Testée et approuvée !