Bonsoir,
En cours, nous avons vu les étapes de l'Hybridation in situ comme ceci :
Fixation au formaldéhyde (+ coupes si l'organisme n'est pas étudié in toto) => Perméabilisation (traitement à la protéinase K) => Hybridation (ajout de la sonde ARN complémentaire) => Lavage (élimination des sondes qui ne complémentent pas) => Saturation des sites anticorps anti-digoxygénine => Révélation (phosphatase alcaline etc.)
Ma question est : la digoxygénine est-elle déjà fixée sur la sonde complémentaire lors de l'étape d'hybridation à proprement dit ou est-elle incorporée après le lavage ?
De plus, pourquoi faire la saturation des sites Ac anti-digoxygénine après l'hybridation et le lavage alors qu'en immmunodétection on sature (à la BSA par exemple) avant l'incubation avec l'Ac primaire ?
Merci d'avance !
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