Concentration négative et résultat PCR

[invite3268f31f]

Bonjour tout le monde,

J'ai extrait des mitochondries à partir des myoblastes de souris, le culot qui s'est formé était petit, je l'ai resuspendu dans le réactif recommandé, en fait quand j'ai mesuré la concentration de mes échantillons en utilistant la méthode de BradFord, le spectro m'a indiqué des concentrations négatives,méme quand j'ai pris les valeurs de l'absorbance pour calculer les concentrations à partir de relation y= ax+b, les valeurs étaient négatives aussi, est ce que vous pourriez m'aider à expliquer ces valeurs négatives, s'il vous plait ?

Une deuxième chose ,pour le teste de détection de mycoplasme basé sur une simple PCR ,j'ai eu: les 3 bandes qui correspondent à mes échantillons étaient moins intenses que le controle négatif, je me suis dis que peut étre mes échantillons étaient inhibés, j'ai refait mon PCR mais j'ai eu le méme résultat ?

Vous trouverez mon résultat PCR dans l'image attachée ,

Merci d'avance
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[invite444a246d]

Pour le Bradford, on peut imaginer plusieurs choses :

Ton culot est trop petit pour que la concentration protéique soit suffisante à dépasser le seuil à partir duquel tu peux déterminer une concentration,
Ta gamme est mal réalisée,
As tu clarifié le culot? Il est possible que certains composant du culot réagissent de manière indésirée avec le réactif de Bradford,

Pour la PCR, as-tu déposé un marqueur? Si oui, quelle est la taille des différents fragments observés?

Cham

[invite3268f31f]

Pour le Bradford, on peut imaginer plusieurs choses :

Ton culot est trop petit pour que la concentration protéique soit suffisante à dépasser le seuil à partir duquel tu peux déterminer une concentration,
Ta gamme est mal réalisée,
As tu clarifié le culot? Il est possible que certains composant du culot réagissent de manière indésirée avec le réactif de Bradford,

Pour la PCR, as-tu déposé un marqueur? Si oui, quelle est la taille des différents fragments observés?

Cham

Bonjour,

Je vous remercie pour vos réponses,

Pour le culot, oui comme je vous ai déjà dit, il était petit, mais clairifier le culot ??? non je l'ai resuspendu dans le réactif recommandé, comment je le clairifie ?

pour mon PCR, oui j'ai déposé un marqueur, en fait

Le controle positif: la première bande est d'environ 267 pb, la deuxième bande est d'environ 190 pb
Pour le controle négatif et mes échantillons: bande est d'environ 190 pb aussi,

Merciiiiii