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Miniprep : impact de SDS/ NaOH à long terme sur la solution bactérienne



  1. #1
    dams7325

    Miniprep : impact de SDS/ NaOH à long terme sur la solution bactérienne

    Bonsoir,
    Nous avons fait une miniprep par lyse alcaline. Il y a une seule étape qui me pose problème, c'est lorsque l'on ajoute le SDS/NaOH (dont je connais le rôle) on observe un changement physique du milieu, translucide et plus visqueux. A ce moment on ajoute la solution de neutralisation de la basicité. Pourquoi à ce moment là? Apparemment si on laisse trop longtemps agir SDS/NaOH on perd une grande partie de l'ADN mais je ne sais pas pourquoi.
    Merci de bien vouloir m'aider, bonne soirée.

    -----


  2. #2
    nowell

    Re : Miniprep : impact de SDS/ NaOH à long terme sur la solution bactérienne

    Bonjour,

    L'ADN génomique des bactéries est ancré à la membrane. Cette manip permet de lyser les membranes et donc de purifier le milieu séparant alors membranes + ADN génomique et milieu + cDNA. Je pense que la tro pforte basicité du milieu couplé aux fortes charges du SDS risque de dénaturer le cDNA à la longue...

    Cordialement
    nowell
    Si les faits ne correspondent pas à la théorie, changez les faits. (A. Einstein)

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